如何分離和鑒定動物病毒

㈠ 口蹄疫病毒怎麼分離與鑒定

應用細胞培養、電鏡觀察、反向間接血凝試驗、RT�PCR及測序技術對FMD疑似組織病料進行分離鑒定，確定其血清型及基因型。結果顯示,分離鑒定的FMD疑似組織病料為O型Cathay口蹄疫病毒株。

㈡ 病毒毒株是怎麼分離的

病毒毒株分離就是用含病毒的標本材料接種到適合的細胞裡面。在這過程中要保證絕對的無菌環境操作，排除各種雜菌和其它微生物的污染。所以，一個有資質的、絕對干凈，無污染的實驗室和保證安全潔凈的標准操作是整個流程的關鍵點。

成功分離出新型冠狀病毒毒株的浙江省疾控中心微生物檢驗所所長張嚴峻：我們從病人痰液標本裡面給它(新型冠狀病毒毒株)處理了以後，接種到相應的細胞里，(讓)這個病毒在細胞里能夠生長。到了1月24日，我們對培養物進行鑒定，病毒已經在細胞里增殖，說明這個病毒培養分離已經成功了。

不是隨便一個實驗室都具有分離培養新型冠狀病毒的資質，要有這個資質，至少要有生物安全三級實驗室，而且實驗室人員資質、工作流程、污染物的處理都要通過嚴格的審核，同時對於每一種高致病性病毒分離培養活動，都要專門向國家衛生健康委員會提出申請，經過審核後才能開展特定的分離和培養活動。

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分離病毒毒株的意義

這能知道病毒是通過什麼樣的途徑侵入到人體當中怎樣的細胞器官里去的、在人體裡面是怎麼樣繁殖的、哪些部位會產生一些毒粒、這些毒粒怎樣作用於人類讓人類生病、最後這個病毒怎樣排出來再去感染人。通俗說可以知道它是誰、它到底要到哪裡去、去的哪個地方它到底要做哪些事情、做完壞事情之後它又怎樣逃出來到另外一個地方去干同樣的壞事，整個過程都可以給它弄清楚。

了解了整個過程之後，醫葯專家就可以針對性地去研究相應的葯物和疫苗，對病毒的預防、治療有著重大意義。

㈢ 病毒鑒定常用方法有哪些

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
（一）臨床標本檢測。
1．病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。
（1）核酸檢測：採用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
（2）病毒分離：將標本接種於蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以後，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2．血清學檢測
（1）血清特異性IgM抗體：發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易於產生假陽性。
（2）中和抗體：採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。
1．標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲，按照採集地點，每10～20隻為一份進行研磨處理。
2．病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3．病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。

㈣ 病毒DNA提取技巧

以下是從動物病毒中快速提取DNA的方法，請參考該方案採用離心操作，適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組DNA。以下步驟都在室溫下進行。 1． 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿，充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘余組織。 2． 取150 μl上清液至新的潔凈離心管中。 3． 加入500 μl DNA提取液至上清液中，顛倒混勻，室溫靜置5-10min裂解病毒。 4． 把DNA吸附柱裝在2ml收集管中，把裂解後的液體全部轉移至DNA吸附柱中，10,000 rpm離心1 min。 5． 倒棄濾液，把DNA吸附柱裝回收集管中，加入400 μl洗滌液至DNA吸附柱中，10,000 rpm離心1 min。註：洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。使用完立即蓋上蓋，以防乙醇揮發。 6． 重復步驟5。 7． 倒棄收集管中的濾液，把DNA吸附柱裝回收集管中，10,000 rpm離心3 min。 8． 把DNA吸附柱裝在新的潔凈離心管中，加入30-50 μl洗脫液至吸附柱中央，靜置1-2min，10,000 rpm離心1min，所得即為DNA溶液，可用於後續實驗，若暫時不用，應於-20 ℃可儲存。

㈤ 發生禽流感後如何採集分離病原及運送病料樣品

診斷很大程度上依賴於樣品的質量、樣品在進行實驗室處理前的儲存和運輸過程的情況。用於細胞培養、雞胚接種、直接檢測病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的樣品，應在流感症狀出現的開始3天進行採集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳動物及禽類上呼吸道採集的樣品適合用於流感病毒的鑒定和診斷。上呼吸道拭子分為鼻棉拭子、喉棉拭子和氣管棉拭子三種。已屠宰或已死亡的哺乳動物應在下呼吸道採集樣品，樣品分為氣管棉拭子、支氣管棉拭子、肺組織等三種。禽類樣品採集的部位應集中在呼吸道和大部分的消化道，採集的病毒樣品種類包括泄殖腔棉拭子和糞便，其中泄殖腔棉拭子可從活體雞或剖殺的雞群中採集，從雞舍或環境中採集糞便樣品是常用的采樣方法，但其具有不能准確確定樣品來源的缺點，如果懷疑死禽體內含有高致病力的禽流感病毒，還應採集有代表性的內臟器官如腦、脾臟、心臟、肺臟、胰腺、肝臟和腎臟以及呼吸道、消化道等部位的樣品。

如果想通過對感染細胞進行免疫熒光染色的方法直接檢測病毒，那麼採集的病料應放在冰浴中，在1～2小時內進行樣品處理。用於分離病毒的樣品，采完樣後應立即將病料放在冰箱中冰凍，並盡可能早地接種於敏感細胞或雞胚。如果樣品不能在48～72小時內處理，應冷凍在-70℃或以下。如果裝樣品的試管沒有被密封，或者裝樣品的塑料袋封閉不嚴，則樣品不能放在乾冰中運輸或儲存。因為乾冰接觸到病料樣品後，能很快地滅活其中可能存在的流感病毒。

採集的樣品應放在適宜的運輸緩沖液中才能確保病毒的分離。目前已有一些適用於不同病毒樣品的運輸緩沖液，例如Hanks平衡鹽溶液、細胞培養液、磷酸鹽緩沖液、胰蛋白腖—磷酸肉湯、犢牛肉湯和蔗糖磷酸緩沖液等，在這些運輸緩沖液中應添加0.5%～1%的蛋白質，例如牛血清白蛋白、明膠，還應添加抗生素以防止細菌的生長。

㈥ 如何利用實驗動物接種樣本分離培養病毒

實驗動物在病毒學研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續傳代通過，以減弱有毒株對人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機理的研究。
常用的實驗動物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、綿羊、雞、猴等。在病毒學研究中，動物接種時為避免動物本身可能帶有病毒，多採用實驗室自己繁殖的動物。首先根據研究目的選擇動物種類，對病毒致病機制的研究，則選擇愈接近人類的高等動物（例如靈長類）研究結果愈有價值；其次要注意動物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素，一般年幼的動物比成年動物對病毒的敏感性高。至於接種的途徑應根據病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內注射最敏感。

㈦ 怎麼進行動物病毒毒株的篩選，只要求解釋基本原理和過程，謝謝！

可以改變培養基的成分，例如PH值，營養物質，溫度等條件。要看這種動物病毒適合什麼條件。比如這種病毒適合在含氮的培養基里生存，而其他病毒不適合。那就以這個含氮的培養基為唯一氮的來源。來篩選。

㈧ 如何從發病動物中分離病毒

細胞破碎，離心，病毒都在上清里。