動物細胞傳代的步驟有哪些

1. 動物細胞培養中如何保證在傳代過程中不被微生物污染

首先，器具應做無菌處理，通常要在培養液中添加一些抗生素，可防止污染，應定期更換培養液，以便清除代謝產物，防止其積累對細胞自身造成傷害。另外，要從實驗步驟抓起，如下：
1．人無菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。

2．倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。3．超凈台檯面應整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。

4．打開超凈台的紫外燈照射檯面20min左右，關閉超凈台的紫外燈，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。

5．點燃酒精燈；取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒後插在無菌試管內。

6．將培養用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰後斜置於酒精燈旁的架子上。

2. 動物細胞的基本過程

取動物胚胎或幼齡動物器官、組織。將材料剪碎，並用胰蛋白酶處理（消化），處理形成單個細胞，將單個的細胞放入培養基中配成一定濃度的細胞懸浮液；懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，成為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂生長到互相接觸時，細胞就會停止分裂增殖，出現接觸抑制。此時需要將出現接觸抑制的細胞重新使用胰蛋白酶處理。再配成一定濃度的細胞懸浮液。另外，我們將培養10代以內的培養稱為原代培養。10代以後的稱為傳代培養。培養10~50代的細胞稱為細胞株。當培養超過50代時，大多數的細胞已經衰老死亡，但仍有部分細胞發生了遺傳物質的改變出現了無限傳代的特性，即癌變。此時的細胞被稱為細胞系。

3. 動物細胞培養的一般步驟是什麼

一、復甦
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概1-1.5分鍾），拿出來噴點酒精放到超凈工作台里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鍾。
3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。
4.標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。
5.3天換一次培養基。
二、傳代
1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養基吸掉。
3.加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鍾。
4.細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鍾。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。
8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。
三、 凍存
把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鍾，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中保存。
凍存液的配製： 70%的完全培養基 20񳀐%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

要注意的就是無菌操作！

4. 動物細胞培養過過程

1、取動物組織塊剪碎
2、用胰蛋白酶處理分散成單個細胞
3、製成細胞懸液
4、轉入培養液中進行原代培養
5、貼滿瓶壁的細胞用胰蛋白酶分散為單個細胞製成細胞懸液
6、分瓶轉入培養液進行傳代培養

5. 誰有細胞傳代培養具體的操作步驟和注意事項

懸浮細胞可採用加入等量新鮮培養基後直接吹打分散進行傳代，或用離心法後，加入新培養基後再吹打分散進行傳代

貼壁細胞實驗需准備超凈台噴灑酒精，紫外照射30min。准備好培養瓶/皿，離心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，帶上手套，口罩等，倒去舊培養基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等。

加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。加入1～2滴管含有血清的培養液，反復吹打細胞，使其成細胞懸液。

以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養基，並在培養瓶上做好標記，註明代號、日期，輕輕搖勻，37℃CO2培養箱培養。細胞培養24h後，即可觀察培養液的顏色及細胞的生長情況。

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注意事項

1、傳代培養時要注意無菌操作並防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。培養用液應嚴格分開。

2、每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標准：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長緻密時即可傳代。

3、如發現細胞有污染跡象，應立即採取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BSS或培養基反復清洗，隨後培養基中加入較大量的抗菌素，並經常更換培養基等。

6. 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。

在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

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進入細胞間開始細胞培養時，注意事項：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

7. 動物細胞培養中的細胞株和細胞系以及原代培養和傳代培養該如何簡單的理解死抄概念者不理！用自己的話解

動物細胞培養,大致的步驟是這樣:
1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配製成細胞懸浮液.把細胞液放到培養瓶中,在培養箱里培養--------原代培養.

2.但是,不要以為這樣就能一直無限培養下去.

因為細胞在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止分裂增殖，出現一種接觸抑制.

我們為了它們能繼續增殖,就用胰蛋白酶再把它們分開,然後再配製成細胞懸浮液,分開裝到好幾個瓶子里繼續培養--------傳代培養.

細胞株&細胞系
1.它們都是傳代培養裡面的概念.都是10代以後的

2.細胞株是傳代培養里10~50代,細胞系是50代以後的;

3.對於細胞繁殖而言,傳到10代就很不容易了,所以細胞株是極少數的細胞

4.50代以後,細胞繁殖會出現另一個危機,基本上沒有什麼細胞能再傳下去了.但是,有細胞發生了基因突變,像一個癌細胞一樣無限地分裂下去,這就是細胞系.

8. 傳代細胞的培養步驟

1、附著型胞(adherentcell)

（1）吸掉舊培養液。

（2）用D-PBS洗滌細胞一至二次。

（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用數分鍾，於倒立顯微鏡下觀察，當細胞將要分離而呈現圓粒狀時，吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA作用後，加入適量含血清之新鮮培養基終止trypsin作用，離心後再吸掉上清液。

（4）輕拍培養瓶使細胞自瓶壁脫落，加入適量之新鮮培養基，以吸管上下吸放數次以打散細胞團塊，混和均勻後，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。

2、懸浮型細胞(suspensioncell)

（1）吸出細胞培養液，放入離心管中，離心1000rpm5分鍾。

（2）吸掉上清液，加入適量之新鮮培養基，混和均勻後，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。

3、融合瘤(hybridoma)

有些hybridomacell需培養三天以上才會產生抗體，若是更換培養基，則可能會失去抗體。因此繼代培養不需離心後更換培養基，直接添加新鮮培養基稀釋細胞濃度即可。若體積太大，可傾斜放置，或分殖至新培養瓶中。

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傳代方法：

1、懸浮生長細胞傳代

多採用離心法傳代。1000轉/分,20-30秒後去上清。沉澱細胞加新培養液後再混勻傳代。亦有直接傳代 法，即懸浮細胞沉澱在瓶壁時，將上清培養液去除1/2-1/3，然後用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代.

2、半懸浮生長細胞傳代（Hela細胞）

此類細胞部分呈現貼壁生長現象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來，進行傳代。

3、貼壁生長細胞傳代

採用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

9. 細胞培養的一代生長過程如何

一代貼附生長細胞的生長過程
「-代」指的是從細胞接種到下一-次再傳代接種的一段時間
潛伏期(緩慢)
游離期:細胞接種後在培養液中呈懸浮狀態,此時胞體呈圓球形。一般10分鍾一4小時。
貼壁期:貼附並逐漸伸展- -般24小時內貼壁。
潛伏期;此時細胞有生長活動,而無細胞分裂。細胞株潛伏期-般為6 ~ 24小時。
指數生長期(增殖迅速)
細胞數隨時間變化星指數增長,活力最佳,最適合進行實驗研究

停滯期(生長停止):

細胞數量達到飽和密度,細胞就停止增殖。

10. 細胞工程的步驟是怎麼樣的

植物細胞培養的基本過程主要包括的步驟：（1）從健康植株的特定部位或組織，如根、莖、葉、花、果實、花粉等，選擇用於培養的起始材料，（2）用一定的化學葯劑（最常用的有次氯酸鈉、升汞和酒精等）對外植體表面消毒，建立無菌培養體系。這是獲得培養成功的重要一步。（3）形成愈傷組織和器官，外植體塊在培養基上形成疏鬆的愈傷組織，由愈傷組織分化出芽並可進一步誘導形成小植株。另一途徑是用外植體或愈傷組織細胞經液體懸浮培養誘導胚壯體再長成植株。胚壯體的形成可大大提高繁殖效率，並可減少變異
動物細胞培養的主要步驟：（1）在無菌條件下，從健康動物體內取出適量組織，剪切成小薄片；（2）加入適宜濃度的酶與輔助物質進行消化作用使細胞分散；（3）將分散的細胞進行洗滌並純化後，以適宜的濃度加在培養基中，於37°C下培養，並適時進行傳代。