如何制備動物細胞懸液

『壹』 動物細胞工程中，製成細胞懸浮液後 接著該如何進行原代培養和傳代培養

取動物胚胎或幼齡動物器官、組織。將材料剪碎，並用胰蛋白酶處理（消化），處理形成單個細胞，將單個的細胞放入培養基中配成一定濃度的細胞懸浮液。懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，成為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂生長到互相接觸時，細胞就會停止分裂增殖，出現接觸抑制。此時需要將出現接觸抑制的細胞重新使用胰蛋白酶處理。再配成一定濃度的細胞懸浮液。另外，我們將培養10代以內的培養稱為原代培養。10代以後的稱為傳代培養。培養10~50代的細胞稱為細胞株。當培養超過50代時，大多數的細胞已經衰老死亡，但仍有部分細胞發生了遺傳物質的改變出現了無限傳代的特性，即癌變。此時的細胞被稱為細胞系。

『貳』 0.5% 雞紅細胞懸液怎樣配製

0.5% 雞紅細胞懸液怎樣配製
0.5％紅細胞懸液的制備：取全血1ml,加等滲鹽水2 3ml,充分 搖勻離心沉澱,棄去上清液,然後再加生理鹽水2 3ml 按上述方法洗滌,共三次.100ml生理鹽水加0.5ml紅細胞（離心後沉澱的血）=0.5%

『叄』 貼壁細胞計數的細胞懸液如何制備

可以用細胞培養液來稀釋
當然要吹打了
一般來說25平方厘米方瓶20毫升液就夠了
加液的多少主要是為了稀釋和計數時計算用的。
沒有具體的規定。

『肆』 制備兔血紅細胞懸液為什麼要用0.75的生理鹽水

制備紅細胞懸液的程序一般是用生理鹽水洗滌紅細胞，除去其表面的附著物，然後配成所需要的濃度。
洗滌紅細胞的具體方法是：
先將抗凝血以2000r／min離心5min，吸去血漿層。在管中加2～3倍的生理鹽水用毛細滴管輕輕地反復吹吸混勻，再以2000r／min離心5min，棄上清液，如此反復三次。最後一次可適當延長離心時間至10min。這樣壓積後的紅細胞，上清液透明無色。棄上清液後，用壓積紅細胞配成實驗要求所需的濃度備用。紅細胞洗滌次數不宜太多，以三次為宜，否則紅細胞脆性增加，影響試驗結果。
若是用於制備溶血素的紅細胞，應無菌操作。

『伍』 在動物細胞工程中，常常需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶對動物組織進行處理，使之分散成單個細胞以製成細胞懸

動物組織的細胞之間相連的物質的化學本質是蛋白質，所以用胰蛋白酶或膠原蛋白酶對動物組織進行處理，使其水解成小分子物質，從而使動物組織分散成單個細胞以製成細胞懸液．因此，胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用於蛋白質中連接兩個氨基酸分子的化學鍵即肽鍵．
故選：C．

『陸』 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。

在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

(6)如何制備動物細胞懸液擴展閱讀：

進入細胞間開始細胞培養時，注意事項：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

『柒』 在動物細胞培養過程中,先後兩次用胰蛋白酶,配製成細胞懸浮液,其作用分別是

第一次作用是洗掉原培養基吸附在細胞上的殘留血清等物質，充當洗換液的作用，其實可以用其他溶液替代，比如PBS、hank`s、edta等，因為原培養基中殘留血清會鈍化胰酶，所以應當洗去；第二次用胰酶的的作用就是消化細胞，從而得以製得細胞懸液。

『捌』 大腸桿菌的菌懸液怎麼制備

先把菌液稀釋一定濃度後再用細胞計數板來確定菌濃度
實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數目。
具體操作：
1. 將計數板及蓋片擦拭乾凈，並將蓋片蓋在計數板。
2. 將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間，靜置3min，注意蓋片下不要有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中。
3. 計算板四大格細胞總數，壓線細胞只計左側和上方的。然後按公式計算：
細胞數/mL=四大格細胞總數/4×104
說明：公式中除以4，因為計數了4個大格的細胞數。
公式中乘以104因為計數板中每一個大格的體積為：
1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
（注意：鏡下偶見有兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液）

『玖』 如何獲得細胞懸液

植物組織離體培養,獲得愈傷組織,之後可用相關的纖維素酶等進行酶解或是進行液體懸浮系組織培養在進行酶解,就可以得到單細胞懸浮液,一般用液體培炎的懸浮液酶解效果較好.