『壹』 促進動物細胞融合常用的化學誘導劑是什麼
聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)結構為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大於200小於6000者均可用作細胞融合劑。PEG經高壓滅菌後,與溫熱的Engle氏液混合。
一般選用分子量為4,000,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。
(1)動物融合怎麼誘導擴展閱讀:
在一般條件下,聚乙二醇是很穩定的,但在120℃或更高的溫度下它能與空氣中的氧發生作用。在惰性氣氛中(如氮和二氧化碳),它即使被加熱至200~240℃也不會發生變化,當溫度升至300℃會發生熱裂解。加入抗氧化劑,如質量分數為0.25%~0.5%的吩噻嗪,可提高它的化學穩定性。它的任何分解產物都是揮發性的,不會生成硬殼或粘泥狀的沉澱物。
『貳』 動物細胞融合的具體步驟是怎樣的
細胞融合的具體步驟包括:(1)細胞准備。分貼壁和懸浮細胞兩種,前者可直接將兩親本細胞混合培養,後者需製成一定濃度的細胞懸浮液。
(2)細胞融合。加促融因子於將行融合的細胞之中,誘導融合。
(3)雜種細胞選擇。利用選擇性培養基等,使親本細胞死亡,而讓雜種細胞存活。
(4)雜種細胞克隆。對選出的雜種細胞進行克隆(選擇與純化),經過培養,就能獲得所需要的無性繁殖系。
『叄』 不同動物細胞融合的特點和誘導因素是什麼
1、病毒誘導融合 病毒是最早採用的融合劑。常用於誘導動物細胞融合的病毒有仙台病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙台病毒最常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。
優點:融合率較高,對各種動物細胞都適宜,且仙台病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養;
缺點:仙台病毒不穩定,在保存過程中融合活性會降低,並且制備過程比較煩瑣。此外,病毒引進細胞後,可能會對細胞的生命活動產生干擾。
2、聚乙二醇(PEG)誘導融合
聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉澱蛋白質的作用,能夠有效地促進植物原生質體和動物細胞的融合。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇,就會發生細胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,就會發生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理,目前還不太清楚。
優點:聚乙二醇是化學試劑,使用起來很方便,誘導細胞融合的頻率比較高
缺點:PEG有一定毒性,對有些細胞(如卵細胞)不適用。
3、電融合 20世紀80年代建立起來的電融合技術,是將兩種細胞的混合液置於低壓交流電場中,使細胞聚集成串珠狀,然後施加高壓電脈沖,以促使細胞融合。緊密排列的細胞,在相互接觸的細胞膜之間會出現無蛋白顆粒的脂質區,當受到電擊時,這個區域就會被擊穿,產生脂雙層膜孔,導致細胞之間的細胞質連通,進而發生細胞融合。
電融合技術有許多優點,如誘導細胞融合的頻率高,對細胞無毒害作用,操作簡便,可重復性好。
『肆』 動物細胞融合的方法原理
誘導細胞融合的方法有三種:生物方法(病毒)、化學方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(離心,震動,電刺激)。某些病毒如:仙台病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介導病毒同宿主細胞融合,也可介導細胞與細胞的融合,因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導細胞融合。化學和物理方法可造成膜脂分子排列的改變,去掉作用因素之後,質膜恢復原有的有序結構,在恢復過程中便可誘導相接觸的細胞發生融合。
細胞融合不僅可用於基礎研究,而且還有重要的應用價值,在植物育種方面已經成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。 而動物細胞融合技術最重要的用途是制備單克隆抗體。
原理:細胞膜具有一定的流動性
『伍』 誘導動物細胞融合的方法是
動物:物理法、化學法(同植物)以及生物法(滅活病毒等);