動物細胞培養後的細胞如何收集

① 動物細胞培養的注意事項

原代動物細胞培養：
1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料後要低溫保存，並盡快進行細胞分離實驗。
2、無菌操作。操作時用的培養液，可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈黴素。
3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。
貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利於細胞游離。
4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同，根據所分離細胞的特性選擇。

傳代細胞培養：
1、無菌操作
2、控制消化時間
3、及時關注細胞生長狀態

② 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。

在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

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進入細胞間開始細胞培養時，注意事項：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

③ ATCC細胞培養主要有哪些流程

為了能夠在ATCC細胞培養實驗中成功使動物細胞完好的生長繁殖，人們應在開展細胞培養實驗時提前做好充足的准備工作，從而能夠避免由於准備工作的不到位以及對某一環節的疏忽導致實驗出現無法進行的情況，事先了解清楚動物細胞培養的主要流程則具有關鍵作用。那麼，高質量的動物細胞培養主要具有哪些流程？
一、准備工作。人們在開展動物細胞培養實驗時應做好充足的實驗相關物品准備工作，不僅要對實驗器皿進行全面的清洗、乾燥和消毒工作，而且還應對培養基與其他相關試劑進行配置、分裝和滅菌工作，同時還要對實驗室的操作台進行清潔和消毒工作，從而保證實驗物品能夠不受細菌等物質的污染。
二、取材。當人們完成好動物細胞培養實驗的准備工作後則應進行取材工作，在這一流程中需要要求在無菌的環境下提取出動物細胞並經過一系列的處理工作後接入培養器皿中，為了避免接觸到有害物質影響實驗的成功率應保證在無菌的環境中完成取材工作。
三、培養。為了使動物細胞快速食物進入到生長狀態中，人們在進行動物細胞培養實驗的培養過程中應將取得的動物細胞接入專用的培養器皿中，同時在培養過程中還應仔細觀察以及記錄好動物細胞每個階段的生長狀況。
四、凍存和復甦。在動物細胞培養的凍存和復甦這個流程中，為了使實驗獲得的細胞能夠保存好應進行凍存工作，並且在將細胞收集到凍存管中還應注意加入含有保護劑的培養基中，如需要將凍存的細胞進行復甦時則將從液氮中取出的凍存管放入與人體體溫相接近的溫水中即可。
以上內容就是高質量的ATCC細胞培養主要具有的流程，通過做好准備工作、取材、培養以及凍存和復甦等四個流程，選擇在售後好的動物細胞培養專業機構在進行實驗不僅能夠有效提高動物細胞培養實驗的成功率而且還能夠提供較專業的技術指導以及操作環境。
CCR-2B 血管生成素-1抗體
CCR-3 血管內皮細胞粘附分子抗體
CCR-4/CD194 血管內皮細胞粘附分子抗體
CCR5 血管內皮細胞生長因子受體-3抗體
CCR6/CD196 血管內皮細胞生長因子受體3抗體
CCR7/CD197 血管內皮生長因子受體相關蛋白抗體
CCR8 血管內皮生長因子受體2抗體
CCR-9 血管內皮生長因子受體1抗體
CCRK 血管內皮生長因子抗體

④ 培養的動物細胞通常取自什麼樣的組織或器官

（1）動物胚胎或幼齡動物的組織、器官代謝旺盛，分裂能力強，故可作為動物細胞培養的材料．
（2）容器A的動物器官或組織首先要進行的處理是剪碎，然後用胰蛋白酶處理，這是為了使細胞分散開．這樣做的目的是使每個細胞能與培養液接觸．
（3）培養首先在B瓶中進行．瓶中的培養基成分有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等．在此瓶中培養一段時間後，有許多細胞衰老死亡，這是培養到第10代，到這時的培養稱為原代培養．
（4）為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用胰蛋白酶處理，然後配置成細胞懸浮液，再分裝．
（5）在C瓶中正常培養了一段時間後，發現細胞全部死亡，原因是細胞沒有發生癌變．
故答案為：
（1）動物胚胎或幼齡動物的組織、器官
（2）剪碎 胰蛋白 使每個細胞能與培養液接觸
（3）葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清 10 原代培養
（4）胰蛋白酶 細胞懸浮液
（5）細胞沒有發生癌變

⑤ 動物細胞培養的一般步驟是什麼 動物細胞培養的步驟簡介

1、復甦，把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概1-1.5分鍾），拿出來噴點酒精放到超凈工作台里。把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鍾。把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。3天換一次培養基。

2、傳代，培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。把原有培養基吸掉。加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鍾。細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鍾。倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。

3、凍存，把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鍾，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中保存。凍存液的配製：70%的完全培養基 20??%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

⑥ 細胞培養後如何收集

懸浮的細胞，將培養液轉移至離心管中，然後離心，留在下面的是細胞。
貼壁的細胞，一般用含0.25%EDTA的胰酶消化1-3分鍾，需要實時觀察，待細胞間隙變大回縮時加培養基終止消化，然後進行吹打，最後離心收集細胞。

⑦ 動物細胞的培養

.動物細胞培養液的成分：體外細胞培養所需營養物質與體內基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素等。將細胞所需的上述物質按其種類和所需數量嚴格配製而成的培養基，稱為合成培養基。由於動物細胞生活的內環境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動物血清以提供一個類似生物體內的環境，因此在使用合成培養基時，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。
2.動物細胞培養液的特點：液體培養基、通常含動物血清。
3.動物細胞培養的條件：
①無菌、無毒的環境：對培養液和所有培養用具進行無菌處理，通常還要在培養液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外應定期更換培養液，以便清除代謝產物防止細胞代謝產物累積對細胞自身產生危害。
②營養物質：無機物（無機鹽、微量元素等），有機物（糖、氨基酸、促生長因子等） 。
③血清和血漿 (提供細胞生長必須的營養成份) 。
④溫度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4） 。
⑤氣體環境（95%的空氣+5%CO 2的混合氣體） 。
其中5%CO2氣體是為保持培養液的pH穩定 。
3.基本過程
取動物胚胎或幼齡動物器官、組織。將材料剪碎，並用胰蛋白酶（或用膠原蛋白酶）處理（消化），形成分散的單個細胞，將處理後的細胞移入培養基中配成一定濃度的細胞懸浮液。懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，成為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂生長到互相接觸時，細胞就會停止分裂增殖，出現接觸抑制。此時需要將出現接觸抑制的細胞重新使用胰蛋白酶處理。再配成一定濃度的細胞懸浮液。另外，原代培養就是從機體取出後立即進行的細胞、組織培養。當細胞從動植物中生長遷移出來，形成生長暈並增大以後，科學家接著進行傳代培養，即將原代培養細胞分成若干份，接種到若干份培養基中，使其繼續生長、增殖。通過一定的選擇或純化方法，從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質的細胞稱為細胞株。當培養超過50代時，大多數的細胞已經衰老死亡，但仍有部分細胞發生了遺傳物質的改變出現了無限傳代的特性，即癌變。此時的細胞被稱為細胞系。 培養基添加胰島素可促進細胞對葡萄糖的攝取。
與植物細胞的區別
1.培養基不同：植物細胞（固體培養基），動物細胞（液體培養基） 。
2.培養基的成分不同：動物細胞培養必須利用動物血清，植物組織培養則不需要。
3.產物不同：植物組織培養最後一般得到新的植物個體，而動物細胞培養因為動物體細胞一般不能表達其全能性，因此得到的是同一種的細胞。
4.原理不同：植物組織培養的原理為植物細胞的全能性，動物細胞培養的原理為細胞的增殖。
5.過程不同：植物組織培養的過程為脫分化和再分化，動物細胞培養的過程為原代培養和傳代培養。

⑧ 為了進行細胞培養,首先要從生物體取得細胞,目前獲取細胞的方法有兩種,分離法

實驗:細胞培養

1.實驗目的

初步掌握哺乳動物細胞的原代培養與傳代培養的基本操作過程，為生物工程在醫學上的應用打下基礎。

實驗原理 2.

從生物體中取出某種組織或細胞，模擬體內生理條件，在人工培養條件下使其生存、生長、繁殖或傳代，這一過程稱為細胞培養。細胞培養技術的最大優點是使我們得以直接觀察活細胞，並在有控制的環境條件下進行實驗，避免了體內實驗時的許多復雜因素，還可以與體內實驗互為補充，可同時提供大量生物性狀相同的細胞作為研究對象，耗費少，比較經濟，因此成為生物學研究的重要手段。近年來，在體細胞遺傳、分化、胚胎發生、腫瘤發生、免疫學、細胞工程、放射生物學以及老年學等一系列的研究領域中得到廣泛的應用，並取得了豐碩的成果。

細胞培養可分為原代培養和傳代(繼代)培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養;當原代培養的細胞增殖達到一定密度後，則需要做再培養，即將培養的細胞分散後，從一個容器以1:2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。

細胞培養是一種程序復雜、要求條件多而嚴格的實驗性工作。所有離體細胞的生長都受溫度、滲透壓、pH值、無機鹽影響，消毒、配液等均有嚴格的規范和要求，特別是無菌操作是細胞培養成敗的關鍵。