1. 細胞傳代後不貼壁了,成團浮在培養基里,怎麼辦
看下培養液顏色念拆裂,是不是要更換培養御盯液了,做下活性檢測,看是不是有污染,細胞是不是死了。細胞和人一樣,環境不舒服的時候就會表現出來的,養細胞是個細心活,慢仔閉慢來
2. 細胞消化成團怎麼回事細胞還沒用胰酶消化,用PBS洗時,就有大量的細胞脫落下來,是怎麼回事
細胞禪洞消化成團個人認為是和消化酶磨襲爛有關,消化酶是否保存不當(主要為溫度)並且時間過長失去了消化活性(可瞎漏以做酶活測定),或者酶的濃度配的不合適,在允許范圍(防止消化過度損傷細胞)內適當加大酶液量。以上是某f發表的一些淺見解。關於第二個有大量細胞脫落,我想是沒有做好及時的細胞傳代,細胞匯合80%(理想)就應該進行傳代,因為在培養過程中,培養基積累了大量的細胞代謝產物,導致培養基的成分,PH值發生變化,繼續培養下去是有害的:營養成分不足+代謝產物堆積導致貼壁細胞脫落死亡,因此即便你好沒有進行傳代前的消化作用,已經有部分死亡的細胞脫落下來了(LZ君應該是有定時做顯微觀察,染色鑒定死活)
仍舊是某F的淺見- -,望指教
3. 液基細胞學怎麼將成團的細胞散開
一般是槐滾用酶來處理,將細胞膜以外的成分分解掉,然後將細胞游離出來鉛世余。當然,動物細胞,植物細胞和微生物細胞的處理方式各不相同,但原理差不多。如返老果是一些鬆散的細胞團體,則可以用輕柔的物理方法分散。
4. 細胞培養時細胞成團像網狀怎麼回事
主要原沒橡因可能還是細胞質量問題枯早旁,本身代謝就慢或者脆弱;再一個可能跟培養過程中的維護有關系,細胞密度太低或者太高都會導致
細胞凋亡
,死亡的細胞睜做裂解物包裹未凋亡的細胞形成絮狀物,這些絮狀物在顯微鏡下看的話就是細胞聚集。
5. 動物造模細胞不勻能成功嗎
能,DSS UC模型的優勢
1、症狀表現與人UC極度相似,可用於研究急、慢性結腸炎的笑答發生發展機制,也可用於葯物的葯效研究。
2、自由飲用DSS水溶液的建模方式,簡單易行,成模率高,重復性強。
3、用不同濃度的DSS、給葯時間和給葯頻率,可以實現急性和慢性兩種結腸炎模型。模型持續時間長,體現了急性向慢性轉化的動態過程姿凳,解決了UC的慢性化和維持問題,這是以前許多模型無法比擬的。
4、多種屬動物中均可造模:小鼠、大鼠、斑馬魚、豬、果蠅等。
5、聯合氧化偶氮甲烷 (azoxymethane, AOM)用葯,碰冊慧可用於誘發結腸炎相關性癌症 (colitis associated cancer, CAC) 動物模型,成功模擬IBD誘發CAC的過程。
6. 海馬神經元原代培養細胞為什麼會長成團
原代培養心肌細胞作為一種主要的研究模型,被廣泛應用於心血管研究之中.我們實驗室經過長期嘗試,摸索出了一些行之有效的方法,並積累了一些經驗,現總結如下:
1新生大鼠鼠齡的選擇新生大鼠心肌細胞在出生後3 d內具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌細胞則為終末分化細胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生時間越短,其心肌細胞分離後成活率越高,越容易貼壁生長.大量觀測表明,選擇1~3 d齡大鼠分離其心肌細胞進行原代培養較為理想.其中尤以半日齡大鼠心肌細胞培養效果最佳.
2消化酶的選擇及使用
新生大鼠心肌細胞的分離可採用組織塊法和消化法,前者因不易獲得密度均一的細胞且難控製成纖維細胞的生長而較少採用.消化法中常使用的酶有3種:胰蛋白酶、膠原酶I或Ⅱ以及透明質酸酶.透明質酸酶多與胰蛋白酶或膠原酶聯合應用.胰蛋白酶作用較強,容易造成心肌細胞損壞.膠原酶作用較緩散戚和,能消化細胞間質中的膠原纖維以釋放細胞,對細胞損傷小,且在新生大鼠心肌組織,以膠原I為主,故我們選用膠原酶I.文獻報道膠原酶的工作濃度一般在0.6~1 g・L1,我們使用的為0.8 g・L1.膠原酶最好現用現配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌細胞對酶消化極為敏感.消化過度可使肌原纖維出現萎縮,細胞死亡率增加或喪山衫失貼壁能力及搏動能力;消化不足,細胞聚集成團,無法分清細胞邊界,難以形態學觀測.消化過程中使用磁力攪拌器時應注意1)轉速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的時間須結合消化酶濃度確定.(3)將粘附在攪拌子上的心肌組織吹散,使酶液充分接觸組織.(4)適宜溫度為35~37℃.(5)當組織由紅轉白呈半透明狀態時,應停止消化.
4接種的細胞密度
心肌細胞接種密度不僅影響細胞間的相互接觸,進而影響細胞對肥大刺激的反應,而且影響長期培養細胞的成活率.接種細胞的絕對數量應經精確計算.一般而言,應根據實驗的觀測目的決定單逗掘腔位面積上的細胞數量.例如,如作形態學觀測,六孔板中每孔的接種細胞數量應控制在1×105~2×105個;若需收獲心肌細胞作mRNA或蛋白表達水平的觀測,則每孔的接種密度可增加到5×105~6×105個.
7. 細胞成團生長,消化後仍然成團,怎麼辦呢
你試試cell striper (成分就是EDTA)看看
8. 動物細胞模型製作方法
生物細胞模型的製作方法如下
1、准備一盒橡皮泥
2、製作細胞核,選取三種顏色橡皮泥形成對比(兩層、有核孔、染色質)
3、爛灶製作葉綠體,選取一種顏色,注意細部構造(雙層膜含基粒)
4、製作線粒體,雙層膜一定要清晰可見(雙層膜)
5、製作內質網(上有核糖體)
6、製作高爾此禪基體
7、製作中心體,中心體外觀構造為T型。
8、放入橡皮泥小盒中,動物飢扒扮細胞製作完成
9. 細胞培養傳代時細胞抱團怎麼辦
貼壁細胞細胞在培養瓶長成緻密舉蠢攔單層後,繼續生長的空間不足,培養基中的營養成份也消耗較多,同時代謝廢物也檔仿有較多堆積,需要分瓶培養,對細胞進行傳代擴增。對於貼壁不太緊的細胞如293,可以直接吹散後分瓶。而對於貼壁較緊的細胞如CHO,則需要以胰酶消化後再吹散分瓶,一般過程為(以下操作均按無菌操作的要求進行):將長成緻密單層細胞的細胞瓶中原來的培養液棄去;加入0.25%胰酶溶液,視細胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多,以使充分浸潤;一般消化時間約為1至3分鍾,肉眼觀察瓶壁半透明的細胞層,當見到出現細針孔空隙時,棄去胰酶溶液,並加入適量的細胞培養液終止消化;視實驗要求分入多瓶繼續培養,一般為一傳二到一傳四的比例。
這里,胰酶消化的程度是一個關鍵:消化過度則對細胞的活性損傷較大,並有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難於從瓶壁上吹下,反復吹打同樣也會損傷細胞活性。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配製條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍後存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細胞培養正胡瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。以筆者的經驗,以輕吹或加培養液後輕搖可下較好,但對於經驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的。
10. 求助CIK細胞培養中的抱團問題
您好,現在這個行業發展的不錯,生物實驗技術外包也會跟著發展,比如一些高校或者歷鬧肢企業部分實驗不想自己內部開展,或者涉及的設備比較昂貴,技術要求高,都會尋求外包。但是現在競爭也比較大,的得看單位這邊整體做的怎彎慧么樣。
其次要看下你選擇單位的規模如何,上海這邊的肢世,你可以看下基爾頓生物,原代細胞培養,動物造模,整體課題外包。