1. 我想知道細胞破碎的方法及各種方法的原理和優缺點
機械法:主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
常用的細胞破碎方法有反復凍融法、超聲破碎法、酶處理法、自溶法和表面活性劑處理法 。
細胞破碎是提取胞內產物的關鍵步驟,破碎方法的得當與否,直接影響到所提取產品的產量、質量和生產成本。實驗室對組織細胞的破碎方法很多,有機械方法、物理方法、化學方法和生物化學方法等。
(1)動物細胞破碎要多久擴展閱讀:
細胞破碎條件
在破碎前,材料常需要預處理,如動物材料要除去與實驗無關甚至有妨礙的結締組織,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,微生物材料需將菌體和發酵液成分分開等。
對同一實驗材料,由於實驗要求不同,採用的破碎方式也存在一定差異,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必須保持十分溫和的條件,以保持分子的完整性;後者可採用強烈手段。
不同實驗規模、不同實驗材料和實驗要求,使用的破碎方法和條件也不同。一些堅韌組織,如肌肉、植物的根莖等,常需要強烈的攪拌或研磨作用,才能把其組織細胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達到完全破壞細胞的目的。
2. 動物細胞的破碎方法難度大於植物細胞嗎
動物細胞的破碎方法比植物細胞難度小,植物細胞有細胞壁,比動物細胞難破碎。
3. 產生細胞膜懸液,細胞破碎技術有哪些總結原理和優缺點。
液體剪切壓力
原理:通過將樣品從高壓腔轉入到低壓腔時產生的快速壓力落差來破碎細胞。
優點:破碎快速有效,適合大體積細胞破碎。
缺點:可導致樣品溫度升高(操作時需要冷卻系統)
超聲
原理:通過高頻率的聲波破碎細胞。
優點:操作簡單。
缺點:可導致樣品溫度升高,其很難通過冷卻系統降溫,剪切力有可能導致蛋白質受損,噪音較大,破碎量較小。
玻璃珠磨碎
原理:用玻璃珠的攪動來磨碎細胞。
優點:對於很難破碎的細胞(如酵母)非常有用。
缺點:有些慢且有噪音。
滲透壓
原理:從高滲透壓轉向低滲透壓介質。
優點:操作簡便,花費低廉。
缺點:僅用於外壁較脆弱的細胞(如動物細胞)。
反復凍融
原理:通過反復形成冰晶破碎細胞;通常結合酶法裂解下細胞。
優點:操作簡便,花費低廉,產生大量細胞膜碎片。
缺點:慢,也許會損傷敏感蛋白質或者破壞蛋白質和細胞膜的相互作用,產量低。
酶法裂解
原理:常和其他技術一同使用,如反復凍融或滲透壓破碎法;溶菌酶是破碎細菌細胞壁最常用的酶。
優點:溫和,可產生較大的細胞膜碎片。
缺點:慢,產量低。
4. 凍融法細胞破碎一次需要多長時間
1、高速組織搗碎 :將材料配成稀糊狀液,放置於筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至最慢處,開動開關後,逐步加速至所需速度。此法適用於動物內臟組織、植物肉質種 子等。2、玻璃勻漿器勻漿 :先將剪碎的組織置於管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用於量少和動物臟器組織。3、超聲波處理法 :用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震盪破裂,此法多適用於微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,在 1KG至10KG頻率下處理10-15分鍾,此法的缺點是在處理過程會產生大量的熱,應採取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用。4、反復凍融法: 將細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復幾次,由於細胞內冰粒形成和剩餘細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。5、化學處理法: 有些動物細胞,例如腫瘤細胞可採用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞,細菌細胞壁較厚,可採用溶菌酶處理效果更好。無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質量的減少,加入二異丙基氟磷酸 (DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺醯氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活 力,但不是全部,還可通過選擇pH、溫度或離子強度等,使這些條件都要適合於目的物質的提取。
5. 細胞破碎的最簡單方法是
是動物細胞么,在做細胞膜的提取實驗的時候,把成熟的紅細胞直接放清水裡面,它就會吸水脹破的嘛。
6. 體外培養的動物細胞,用超聲波破碎,用於測定一些酶的活力,想問問大家設置的功率及破碎時間、循環次數
有點高,功率大的時候,蛋白質容易降解。10cycles有點少吧,我們破大腸桿菌都是用10s/10s,10min的
7. 細胞破碎的方法有哪些
(1)酸鹼處理:調節pH值,改變蛋白質的荷電性質,提高產物的溶解度。 (2)化學試劑處理:用表面活性劑或有機溶劑(甲苯)處理細胞,增大細胞壁的通透性,降低胞內產物的相互作用,使之容易釋放。 (3)酶溶:利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞後,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。 酶溶的優點:操作溫和,選擇性強,酶能快速地破壞細胞壁,而不影響細胞內含物的質量,但缺點是酶的費用高,因而限制了它在大規模生產中的應用。 化學滲透法與機械破碎法相比:速度低,效率差,且化學或生化試劑的添加形成新的污染,給進一步的分離純化增添麻煩。但化學滲透法選擇性高,胞內產物的總釋放率低,可有效抑制核酸的釋放,料液粘度小,有利於後處理。
8. 細胞破碎的方法及特點
那要看是什麼細胞了,如動物細胞,就可以先用液氮急凍後在研缽中研碎,之後放到離心管里冰浴超聲波粉碎,植物細胞我們沒做過
9. 動物細胞和植物細胞在水中哪個先破裂
動物細胞,因為植物細胞有堅韌的細胞壁支撐,即使吸水,也不會很容易破裂