動物實驗組間差異大應該如何處理

A. 影響動物實驗效果的動物實驗技術因素有哪些

一、動物選擇
選擇好適合研究需要的實驗動物是獲得正確實驗結果和實驗成功的重要環節。應按照不同實驗的要求選擇合適的動物。如作腫瘤的研究工作，就必須了解哪種動物是高癌種，哪種是低癌種，各種動物自發性腫瘤的發生率是多少。如A系、C3H系、AKR系、津白Ⅱ等小鼠是高癌品系小鼠，C3H/He系經產雌鼠有80～100%的自發性乳腺癌。AKR系8～9月齡小鼠有80～90%自發性血病。C57BL系、津白Ⅰ等小鼠是低癌品系小鼠。不同動物對同一因素的反應雖然往往是相似的，但也常常會遇到動物出現特殊反應的情況。如5歲以上的雌狗常自發性乳腺腫瘤，如果給雌狗孕激素，就更容易誘發乳腺腫瘤。雌激素還容易引起狗發生貧血，這在其它實驗動物是很少見的。怎樣選擇好實驗動物可參看實驗動物的選擇和應用一講。

二、實驗季節
生物體的許多功能隨著季節產生規律性的變動。目前已有大量資料表明，動物對化學物作用的反應也受到季節的影響。例如在春、夏、秋、冬分別給10隻大鼠注入一定量的巴比妥納，發現入睡時間以春季最短。秋季最長，而睡眠時間則相反，春季最長，秋季最短（見表11-19）。

表11-19大鼠對巴比妥納反應的季節變動

季節 入睡時間（分） 睡眠時間（分）
春 56.1±11.0 470±34.0
夏 93.5±11.3 242±14.3
秋 120.0±19.0 190±18.7
冬 66.5±8.2 360±33.0
不同實驗季節，動物的機體反應性有一定改變。如不同季節對輻射效應有影響。家兔的放射敏感性在春夏兩季升高，秋冬兩季降低。在狗的實驗中，在春、夏兩季照射後的死亡率比秋、冬為高。小鼠的放射敏感性，在冬季和補夏顯著升高，而初夏和夏季則降低。大鼠的放射敏感性則沒有明顯的季節性波動。因此，這種季節的波動在進行跨季度的慢性實驗時必須注意的。

三、晝夜過程
機體的有些功能還有晝夜規律性變動。例如有人給小鼠皮下重復注入40%的四氯化碳溶液0.2ml後，在同一天不同的時間將動物處死，觀察肝細胞的有絲分裂動態，以了解肝細胞變性的修復情況。結果列於表11-20。資料表明，小鼠肝細胞有絲裂的晝夜變動十分明顯。

表11-20小鼠肝細胞有絲分裂系數（‰）的晝夜變動

分組 晝夜的鍾點
0 2 4 6 7 8 9 10
實驗組 2.4±1.2 2.6±1.2 1.02±0.17 4.11±0.27 0.26±0.06 1.36±0.25 0.66±0.25 0.57±0.08
對照組 2.8±1.86 2.6±0.16 0.2±0 6.3±1.48 0.46±0.07 0.26±0.07 0.97±0.05 0.66±0.04
動物對照射的敏感性在晝夜間有不同的變化，這種變化見於不同性別、種系和年齡的小鼠和大鼠。白天放射敏感性降低（死亡較少，LD50/30較高，體重下降較少，肝臟損傷較輕）夜間升高。同時，在小鼠和大鼠實驗中，除了夜間（21～24點）的高峰外，還發現白天（小鼠9～12點，大鼠15點）損傷加重情況。下午和後半夜射敏感性最低。大鼠與小鼠不同，其放射敏感性雖有晝夜間的明顯波動，但不很劇烈。經實驗證明實驗動物的體溫、血糖、基礎代謝率、內分泌激素的分泌均發生晝夜節律性變化。因此這類實驗的觀察必須設有相應的對照，並注意實驗中某種處理的時間順序結果的影響。為了得到可比性的實驗結果，所有實驗組動物應在同一時間內進行照射或其它實驗處理。

四、麻醉濃度
動物實驗中往往需要將動物麻醉後才能進行各種手術和實驗。要求麻醉濃度要適度，而且在整個實驗過程中要保持始終恆定。因此不能不分別實驗要求和動物品種（或品系）而用同一種麻醉劑，也不能亂用麻醉劑。因為不同的麻醉劑有不同的葯理作用和副作用，應根據實驗要求與動物種類而加以選擇，使用合適。麻醉濃度的控制是順利完成實驗獲得正確實驗結果的保證。如果麻醉過深，動物處於濃度抑制，甚至瀕死狀態，動物各種正常反應受到抑制，那是不會做出可靠的實驗結果的。麻醉過淺，在動物身上進行手術或實驗，將會引起強烈的疼痛刺激，使動物全身，特別是呼吸，循環功能發生改變，消化功能也會發生改變，如疼痛刺激會反射性的長時間中止胰腺的分泌。所以麻醉濃度必須合適。由此也不難理解在整個實驗中保持麻醉濃度的始終一致是如何必要了，因為麻醉濃度的變動，會使實驗結果產生前後不一致的變化，給實驗結果帶來了難以分析的誤差。

五、手術技巧
動物實驗中除了要注意選擇合適的實驗動物，用的試劑要純粹，儀器要靈敏，方法要准確外，還必須注意手術技巧，即操作技術的熟練。手術熟練可以減少對動物的刺激，動物受的創傷、

B. 動物實驗中，熒光定量PCR檢測基因表達時因為老鼠個體差異存在，方差很大，請問這么解決。另外，各位是這么

應該重新設計實驗，注意飼養條件，RNA提取，DNA是否影響等，盡量減少個體差異，不然數據是不可靠的。

C. 實驗組間差異不顯著怎麼辦

1、檢查樣本數據。
2、檢查變數水平。
3、檢查預先做好的假設。可能是變數水平太高，樣本數據差異過大，誤差過大導致，可以逐個排查，最終肯定有個結論。

D. 試驗數據組內差異大有何影響

大數據（big data），指無法在一定時間范圍內用常規軟體工具進行捕捉、管理和處理的數據集合，是需要新處理模式才能具有更強的決策力、洞察發現力和流程優化能力的海量、高增長率和多樣化的信息資產。大數據的5V特點（IBM提出）：Volume（大量）、Velocity（高速）、Variety（多樣）、Value（低價值密度）、Veracity（真實性）,平台有hadoop

E. 生物學上對同一組實驗若兩次實驗結果偏差較大應如何處理

先看趨勢，如果趨勢一致直接算平均值，在生物雪上基本上每次的取樣以及樣本的狀態都會影響實驗結果，一般都是多做幾組，去掉偏差值，然後算平均值和SD如果SD好大那就算SEM，反正取最漂亮的結果上圖

F. 不同處理方法的兩組動物實驗，比較兩組術後存活率是否具有差異性用什麼檢驗方法

卡方檢驗科適用於這種實驗。

G. 動物學實驗的實驗動物常見的處理方法

一、編號
實驗動物常需要標記以示區別。編號的方法很多，根據動物的種類數量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標記方法。
(一)掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹),或將號碼按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用於狗等大型動物。
(二)打號法：用刺數鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然後在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用於耳朵比較大的兔、狗等動物。
(三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前後肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標記。該法適用於大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數量少的情況下，也可用於兔、狗等動物。
(四)化學葯品塗染動物被毛法：經常應用的塗染化學葯品有
塗染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液
塗染黃色：3-5%苦味酸溶液
塗染黑色：煤焦油的酒精溶液
根據實驗分組編號的需要，可用一種化學葯品塗染實驗動物動物背部被毛就可以。如果實驗動物數量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對於實驗周期短的實驗動物較合適，時間長了染料易退掉；對於哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。
(五)剪毛法：該法適用於大、中型動物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動物一側或背部剪出號碼，此法編號清楚可靠，但只適於短期觀察。
(六)打孔或剪缺口法：可用打孔機在兔耳一定位置打一小孔來表示一定的號碼。如用剪子剪缺口,應在剪後用滑石粉捻一下,以免癒合後看不出來。該法可以編至1～ 9999號，此種方法常在飼養大量動物時作為終身號採用。
二、分組
(一)分組的原則：進行動物實驗時，經常需要將選擇好的實驗動物按研究的需要分成若干組。動物分組應按隨機分配的原則，使每隻動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別,影響實驗結果，特別是進行准確的統計檢驗,必須在隨機分組的基礎上進行。
每組動物數量應按實驗周期長短、實驗類型及統計學要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認為處死所喪失的數量，確保實驗結束時有合乎統計學要求的動物數量存在。
(二)建立對照組：分組時應建立對照組。1.自身對照組：是指實驗數據而言。實驗動物本身在實驗處理前、後兩個階段的各項相關數據就分別是對照組和實驗組的實驗結果，此法可排除生物間的個體差異。2.平行對照組：有正對照組和負對照組兩種。給實驗組動物某種處理，而給正對照組用同樣方法進行處理，但並不採用實驗所要求的葯物或手段，負對照組則不給任何處理。3.具體分組時，應避免人為因素, 隨機把所有的動物進行編號，然後令其雙數為A組(實驗組),單數為B組(對照組)即可或反之。如果要分若干個組時，應該用隨機數字表示進行完全隨機分組。 一、實驗動物的除毛
在動物實驗中，被毛有時會影響實驗操作與觀察，因此必須除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脫毛等。
(一)剪毛法：剪毛法是將動物固定後，先用蘸有水的紗布把被毛浸濕，再用剪毛剪刀緊貼皮膚剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮膚。剪下的毛應集中放在一容器內，防止到處飛揚。給狗、羊等動物采血或新生乳牛放血制備血清常用此法。
(二)拔毛法：拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳緣靜脈注射或尾靜脈注射時常用此法。
(三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去動物被毛的方法。如動物被毛較長，先要用剪刀將其剪短，再用刷子蘸溫肥皂水將剃毛部位浸透，然後再用剃毛刀除毛。本法適用於暴露外科手術區。
(四)脫毛法：脫毛法是用化學葯品脫去動物被毛的方法。首先將被毛剪短，然後用棉球蘸取脫毛劑，在所需部位塗一薄層，2～3分鍾後用溫水洗去脫落的被毛，用紗布擦乾，再塗一層油脂即可。
適用於狗等大動物的脫毛劑配方為：硫化鈉10g，生石灰15g，溶於100ml水中。
適用於兔、鼠等動物的脫毛劑的配方為：1. 硫化鈉3g,肥皂粉1g,澱粉7g,加適量水調成糊狀；2. 硫化鈉8g,澱粉7g，糖4g，甘油5g，硼砂1g,加水75ml；3. 硫化鈉8g溶於100ml水中。
二、實驗動物的給葯
在動物實驗中，為了觀察葯物對機體功能、代謝及形態引起的變化，常需要將葯物注入動物體內。給葯的途徑和方法多種多樣，可根據實驗目的、實驗動物種類和葯物劑型、劑量等情況確定。
(一)注射給葯法
1. 皮下注射注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入,固定後即可進行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或側下腹部；豚鼠在後大腿內側、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外側注射，拔針時，輕按針孔片刻，防葯液逸出。
2. 皮內注射此法用於觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內反應。 如將一定量的放射性同位素溶液、顏料或致炎物質、葯物等注入皮內，觀察其消失速度和局部血液循環變化，作為皮膚血管通透性觀察指標之一。方法是：將動物注射部位的毛剪去，消毒後，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內，然後使針頭向上挑起並再稍刺入，即可注射葯液。注射後可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。
3. 肌肉注射當給動物注射不溶於水而混懸於油或其他溶劑中的葯物時,常採用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發達、無大血管經過的部位，多選臀部。注射時針頭要垂直快速刺入肌肉，如無回血現象即可注射。給大、小鼠作肌肉注射時，選大腿外側肌肉進行注射。
4. 腹腔注射先將動物固定,腹部用酒精棉球擦試消毒，然後在左或右側腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進約0.5厘米，再使針頭與皮膚呈45 度角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時有落空感，回抽無腸液、尿液後，緩緩推入葯液。此法大小鼠用的較多。
5. 靜脈注射是將葯液直接注射於靜脈管內，使其隨著血液分布全身,迅速奏效。但排泄較快，作用時間較短。
6. 淋巴囊注射蛙類常採用此法,其皮下有數個淋巴囊，注入葯物甚易吸收。腹部淋巴囊和頭部淋巴囊常作為蛙類給葯途徑。一般多選用腹部淋巴囊給葯。注射時將針頭從蛙大腿上端刺入，經大腿肌層入腹壁肌層，再進入腹壁皮下，即進入淋巴囊，然後注入葯液。
(二)經口給葯法
1. 口服法：把葯物放入飼料或溶於飲水中讓動物自動攝取。此法優點在於簡單方便，缺點是不能保證劑量准確。一般適用於對動物疾病的防治或某些葯物的毒性實驗，製造某些與食物有關的人類疾病動物模型。
2. 灌胃法：在急性實驗中,多採用灌胃法。此法劑量准確。灌胃法是用灌胃器將所應投給動物的葯灌到動物胃內。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構成。小鼠的灌胃針長約4～5cm，直徑為1mm，大鼠的灌胃針長約6～8cm，直徑約1.2mm。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球為中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應口腔、食道的生理彎曲度走向。
(三)其它途徑給葯方法
1. 呼吸道給葯：呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等狀態的葯物或毒氣,均需要通過動物呼吸道給葯。如實驗時給動物乙醚作吸入麻醉、用鋸末煙霧製作慢性氣管炎動物模型等，特別在毒理學實驗中應用更為廣泛。
2. 皮膚給葯：為了鑒定葯物或毒物經皮膚的吸收作用、局部作用、 致敏作用和光感作用等，均需採用經皮膚給葯方法。如兔和豚鼠常採用背部一定面積的皮膚脫毛後，將一定的葯液塗在皮膚上，葯液經皮膚吸收。
3. 脊髓腔內給葯：此法主要用於錐管麻醉或抽取腦脊液。
4. 腦內給葯：此法常用於微生物學動物實驗,將病原體等接種於被檢動物腦內，然後觀察接種後的各種變化。
5. 直腸內給葯：此種方法常用於動物麻醉。兔直腸內給葯時,常採用灌腸的膠皮管或用14號導尿管代替。
6. 關節腔內給葯：此法常用於關節炎的動物模型復制。

H. 動物實驗設計的對照方法有哪些有何作用

（1）空白對照 指不做任何實驗處理的對照組。 （2）自身對照 指實驗與對照在同一對象上進行，即不另設對照組。例如「植物細胞質壁分離和復原」實驗，自身對照，方法簡便，關鍵是要看清楚實驗處理前後現象變化的差異，實驗處理前的對象狀況為對照組，實驗處理後的對象變化則為實驗組。 （3）相互對照 指不另設對照組，而是幾個實驗組相互對照，能較好的抵消無關變數的影響，使實驗結果更具有說服力

I. 在做對比實驗時應該注意控制好實驗組和對照組中的什麼和什麼

對比實驗的實現依靠除要對比的差異之外的條件皆能保持一樣吧，所以要特別注意實驗條件設置時，對比實驗，指設置兩個或兩個以上的實驗組，通過對結果的比較分析，來探究各種因素與實驗對象的關系，這樣的實驗稱為對比實驗。
對比實驗是一種特別的收集證據的方法。通過有意識地改變某個條件來證明改變的條件和實驗結果的關系。
對比實驗要注意的問題：1 每次只能改變一個因素；2確保實驗的公平，即除了改變的那個因素外，其他因素應該保持一樣。
對比實驗不設對照組，均為實驗組和對照組，是對照實驗的一種特殊形式，即相當於「相互對照實驗」。
注意要對比對象的一致性和差別性。就是說我們要控制他們使之有且僅有一個不同點，這樣對比試驗才能夠體現作用、1、變數不同
對照試驗是只有一個條件不同，其他條件都相同。
對比試驗是將兩個研究內容相似的試驗進行對比。設置兩個或兩個以上的實驗組，通過對結果的比較分析，來探究某種因素與實驗對象的關系，這樣的實驗叫做對比試驗。
2、實驗設計不同
可以將對照實驗分為空白對照，如加入等量的清水、蒸餾水或生理鹽水；自身對照，如研究動物的內分泌腺時，先摘除內分泌腺體，一段時間後再移入其腺體或補充一定量的相關激素，以觀察生物自身實驗前與實驗後情況的變化；條件對照，如特意控制一定的可以預知結果的自變數因素，使實驗結果更加令人信服，上述蝌蚪實驗中的第三組就能基本說明問題，等等。

J. 要做動物實驗，分4組，怎麼分組

動物實驗的分組一般按照體重，性別來分組，這樣可以最大可能剔除系統誤差。
建議按照體重分組，先稱重，按照體重大小排序，然後確保每一組內的10隻小鼠的平均體重接近。
這樣進行實驗的話就能確保不因為體重差異過大而影響實驗結果。