如何判斷動物細胞培養的洗液

A. 動物細胞培養 早期胚胎培養 的培養液相同嗎. 兩酸兩鹽兩素一血清。

不同！
一般動物細胞培養使用的培養基為基礎培養基（含有無機鹽離子、谷氨醯胺、丙酮酸鈉、抗生素等）和血清。
而早期胚胎的培養液需要維持胚胎幹細胞的多能性不能使用血清（因為血清會誘導其分化），而使用血清替代物，在基礎培養基基礎上還需要加入一些生長因子如FGF維持。

希望能幫到你！

B. 動物細胞培養基的成分有哪些

動物細胞培養基有平衡鹽溶液、天然培養基、合成培養基、無血清培養液等四種。

平衡鹽溶液：

目前常用的平衡鹽溶液有乳酸鈉和復方氯化鈉溶液（1.86%乳酸鈉溶液和復方氯化鈉溶液之比為1:2）與碳酸氫鈉和等滲鹽水溶液（1.25%碳酸氫鈉溶液和等滲鹽水之比為1:2）兩種。

天然培養基：

天然培養基也稱復合培養基，是含有化學成分還不清楚或化學成分不恆定的天然有機物。

天然培養基主要取自動物體液或從動物組織分離提取。其優點是營養成分豐富，培養效果良好，缺點是成分復雜，來源受限。

合成培養基：

合成培養基（synthetic medium），又稱為組合培養基，是通過順序加入准確稱量的高純度化學試劑與蒸餾水配製而成的，其所含的成分（包括微量元素在內）以及他們的量都是確切可知的。合成培養基一般用於實驗室中進行的營養、代謝、遺傳、鑒定和生物測定等定量要求較高的研究。

無血清培養液：

無血清培養液是不含血清而含有支持細胞增殖和生物反應的多種營養成分（如生長因子、組織提取物等）的細胞培養液。

無血清培養液由基礎培養液和附加成分組成，取代血清的補充物：

1、激素和生長因子；

2、結合蛋白類；

3、低分子量營養因子；

4、貼壁和鋪展因子等。

C. 動物細胞培養的基本過程

一、准備工作

准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，准備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。

二、取材

在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器皿中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。

理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。

取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

三、培養

將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。

細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。

四、凍存及復甦

為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。

在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

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進入細胞間開始細胞培養時，注意事項：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

D. 動物細胞培養的注意事項

原代動物細胞培養：
1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料後要低溫保存，並盡快進行細胞分離實驗。
2、無菌操作。操作時用的培養液，可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈黴素。
3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。
貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利於細胞游離。
4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同，根據所分離細胞的特性選擇。

傳代細胞培養：
1、無菌操作
2、控制消化時間
3、及時關注細胞生長狀態

E. 比較動物細胞培養液和植物細胞的培養基有什麼區別

植物細胞培養要加無機物,有機物.特別注意生長素和細胞分裂素,在不同時期加的量不同.
動物細胞培養要加糖,氨基酸,無機鹽等等.由於還有一些營養物質未搞清楚,所以還要加血清,血漿等天然成分.

F. 動物細胞培養的一般步驟是什麼

一、復甦
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概1-1.5分鍾），拿出來噴點酒精放到超凈工作台里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鍾。
3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。
4.標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。
5.3天換一次培養基。
二、傳代
1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養基吸掉。
3.加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鍾。
4.細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鍾。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。
8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。
三、 凍存
把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鍾，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中保存。
凍存液的配製： 70%的完全培養基 20񳀐%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

要注意的就是無菌操作！

G. 動物細胞培養液的主要成份與植物組織培養培養基的成份有什麼不同

植物組織培養基的成分主要是水，蔗糖，礦質營養-無機鹽，植物激素和瓊脂等。。。通常屬於固態培養基。動物細胞培養液是液態培養基，主要成分是水，糖類-葡萄糖，無機鹽，生長因子和動物血清等。動物血清可以提供現在還不知道的必不可少的營養物質。。。另外它們的無機鹽的成分濃度等不一樣。。。

H. 如何確認所配製的動物細胞培養基沒有被污染

將未接種的培養基在適宜的溫度下，放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生即可。

動物細胞培養需要提供無菌、無毒環境，因此，除了要對培養液和培養用具進行滅菌外，通常還要在培養液中添加一定量的抗生素，以防培養過程中的污染。

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動物細胞培養的條件

（1）無菌、無毒的環境：

①消毒、滅菌；

②添加一定量的抗生素；

③定期更換培養液，以清除代謝廢物。

（2）營養物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．

（3）溫度和PH。

（4）氣體環境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的二氧化碳（維持培養液的PH）。

I. 動物細胞培養液和發育培養液的區別

專一性不同,導致其營養成分不同.胚胎培養液比較全面,它需要提供胚胎生長和發育所需的所有營養成分,二細胞培養液只需提供細胞其能生長分裂的營養就足夠了.

J. 動物細胞培養怎樣檢測有毒物質的,原理是什麼

如果你的意思是利用動物細胞培養來檢測某物質對細胞的毒性如何，即將該物質加入該細胞的培養基當中，濃度高低不同做成一系列梯度（將加了該化學物質的細胞與未加的細胞進行對照比較如果該化學物質不易溶解於該細胞的培養基，則需要多做一個對照組，為加了該物質的溶劑但未加該物質的細胞比較的時候主要看存活率和代謝率兩個指標。