Ⅰ 求助動物組織的DNA提取試劑盒
動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒
操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入休積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用台式離心機
在室溫下離心。
樣品的處理:
a、細胞:取 1×10
6-1×10
7個懸浮培養細胞,12000rpm 離心 1min 收集細胞,貼壁細胞先用胰蛋白酶消化處
理,再用預冷的 PBS 吹打成細胞懸液,然後 12000rpm 離心 1min 收集細胞,盡量除去上清,加 200ul 溶液 A,
振盪至徹底混勻。
b、組織:組織量不宜過大,一般不要超過 25mg,可以使用勻漿器勻漿,最好用液氮研磨成粉末狀,再用
預冷的 PBS 或無菌水充分懸浮,然後 12000rpm 離心 1min 收集細胞,盡量除去上清,加 200ul 溶液 A,振盪至
徹底混勻。
向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),55℃放置 15min。
加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分顛倒混勻,55℃水浴消化,細胞消化時間較短,組織消化時間較長,
一般需要 1-3 個小時才能完成(鼠尾需要消化過夜)。消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化完全為止。
消化完全的指標是:液體清亮及粘稠。
加入 200ul 體積溶液 B,充分顛倒混勻,如出現白色沉澱,可放置於 75℃ 15-30min,沉澱即會消失,不影響後續實驗。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導致提取的 DNA 量少及不純,還有可能導致堵塞
吸附柱。
加入 200ul 無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉澱,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉澱都
加入吸附柱中。
12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸
附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
12000rpm 離心 2min,將吸附柱敞口置於室溫或 50℃溫箱放置數分鍾,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,
否則漂洗液中的乙醇會影響後續的實驗如酶切、PCR 等。
將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置
5min,12000rpm 離心 2min。
可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm 離心 2min,即可得到高質量的基因組 DNA。
注意事項:
試劑盒拆封後,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA片段較小且提取量也下降。
如果試劑盒中的溶液出現沉澱,可在65℃水浴中重新溶解後再使用,不影響效果。
洗脫緩沖液的體積最好不少於50ul,體積過小會影響回收效率:洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響,若需要
用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低於7.0會降低洗脫效率。
Ⅱ DNA會在高溫下被分解嗎……
會。
一般到了90度以上,dna雙螺旋結構就會解開,所以在體外人工合成dna的過程(pcr技術)中,人們將溫度升到95度使dna解旋。
不過,當dna分子解旋後,如果溫度緩緩下降,解開的雙螺旋結構還可以恢復成原先的雙螺旋結構。
Ⅲ 生物之間會相互捕食,那麼問題來了,他們的DNA都哪去了是被消化了還是排出去了,如果DNA不被分解
脫氧核糖核酸(英語:Deoxyribonucleic acid,縮寫為DNA)是一種分子,雙鏈結構,由脫氧核糖核苷酸(成分為:脫氧核糖及四種含氮鹼基)組成。
你剖開生物學觀念,用化學觀點看看,DNA也是一種有機物。化學角度在消化過程中DNA和其他有機物區別不大。
Ⅳ 物品放置多久後DNA會消失
DNA是穩定性較好的遺傳物質,一般遺留在衣物或者衛生紙上,幾年內都是可以採集進行DNA提取的。提取出來的DNA是完整可用的,即便有所降解,也是部分的,繼而可以進行下一部的個體識別或親子鑒定。
歷史
DNA最初是由瑞士生物化學家弗里德里希·米歇爾(Friedrich Miescher)1869年從手術綳帶的膿液中分離出來的,由於這種微觀物質位於細胞核中,當時被稱為核蛋白(nuclein)。
1919年,Phoebus Levene確定了DNA由含氮鹼基,糖和磷酸鹽組成的核苷酸結成。Levene提出DNA由一條通過磷酸鹽結合在一起的核苷酸組成。
Ⅳ DNA分子什麼時候會被水解掉 為什麼要水解掉
理論上說,只要你還活著,DNA都每時每刻在水解...
生物學上解釋的話,DNA在被消化階段就會完全水解,動物體內有些器官是有能分泌DNA水解酶的,這些酶是可以將食物中的脫氧核糖核酸(DNA)完全水解的.
至於,為什麼要水解的話,比如你吃掉食物,然後小腸中的DNA水解酶會把食物中的DNA水解成小分子物質易於消化吸收.
Ⅵ 動物的屍體會腐爛掉是因為微生物的分解通常一具被完全分解掉的動物屍體(包括骨架)需要多長時間裡面
是因為分解者的分解,分解者包括微生物,但不止微生物,比如老鷹也可以幫助分解動物屍體。分解時間不等,一個星期到一個月,甚至兩個月以上都有可能。裡面的有機物會被全部分解,包括DNA。