A. VP實驗中,為何枯草芽孢桿菌會變紅色
伏-普試驗，目的是檢查細菌是否能分解葡萄糖，產生乙醯甲基甲醇。
陽性對照菌是產氣腸桿菌，分解葡萄糖（被檢細菌接種到葡萄糖蛋白腖水中，36℃18~24h）產生丙酮酸，再將丙酮酸脫羧形成乙醯甲基甲醇，在鹼性條件下（乙液-40%KOH溶液），被氧化為二乙醯，與培養基蛋白做鄭腖中精氨酸等所含的胍基（甲液-6%α-萘酚酒精溶液？）結合，通常在10min內形成紅色化合物。
若不顯色，放置於50℃水浴2h，或放置於37℃培養箱中4h，充分搖動，慶胡肆觀察培養液反應結果，不譽轎顯紅色為陰性，陰性對照菌是大腸埃希氏菌。
枯草芽孢桿菌可以分解葡萄糖
B. 自來水中有什麼菌
你照片中的應該是革蘭氏陽性菌祥桐，屬於桿菌類謹兄坦型。
我們熟悉的大腸桿菌是革蘭氏陰性菌。
對於大腸桿菌，如果是處理合格的自來水，應該是每100ml水中不得檢出，以控制病原菌及病原微生物的數量。
其它菌群是每毫升水中允許塵返有100個菌落數。
C. 無菌檢查時,陽性對照菌包括哪六種
根據2015版中國葯典1101：金黃色葡萄球菌毀鉛蘆、大腸埃希菌、生孢梭菌、枯草芽激罩孢桿菌、白色念珠菌、纖帶黑麴黴
D. 生活飲用水檢測大腸埃希氏菌、腸球菌的意義.為什麼選擇五種指示菌呢
生活飲用水一般不檢測大腸埃希氏菌、腸球菌的,也並沒有選擇五種指示菌（根本沒這說法）,基本上都是以一類菌作為一個項目.
其實生活飲用水的檢測項歷喚目有很多,但是如果沒有特殊要求,一般只做三項：細菌菌落總數、大腸菌群、耐熱大腸菌群,這些項目綜合體現了生活飲用水的水質和污染情況.
如果你一定要問那兩個項目的意義,其實大腸埃希氏菌、腸球菌和耐熱大腸菌群的意義是稿爛者基本一致的,都是體現水質受糞便污染的情況.其實耐熱大腸菌群就是因為適合我國國情、檢測成本低廉、方便直觀,這樣才以這個項目來代替大腸埃鍵薯希氏菌的.
E. 生活飲用水中大腸埃希氏菌檢驗探討
水樣中的細菌包括很多「屬」和很多「種", 我國《生活飲用水衛生標准》2006版[ 1] 的衛生學評價標準是以菌落總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌4項作為微生物指標。
總大腸菌群可來自人類和溫血動物的腸道及自然環境, 包含有埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬等一大群在37℃經24小時培養能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。他們在伊紅美藍平板生長特徵是：（1）深紫黑色、具有金屬光澤；（2）紫黑色、不帶或略帶金屬光慎瞎敗澤；（3）淡紫紅色菌落。
耐熱大腸菌群，又稱糞大腸菌群，主要包括埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬[6],是利用提高溫度的方法將大自然的大腸菌群和糞便中的大腸菌群區分開的，它是一群能在44.5 ℃下生長的大腸菌群，只有來源於動物和人類糞便的大腸菌群能生長，而來自大自然的大腸菌群不能耐熱生長[8-9]。
大腸埃希氏菌(Escherichiacoli),以前常稱大腸桿菌, 廣泛存在於人類和溫血動物的腸道中, 是人類和動物腸道中需氧性共生菌的優勢菌群, 維持宿主健康部分生理功能必需的腸道菌.雖然大多數的大腸埃希氏菌為非致病菌, 但是當宿主免疫力降低或細菌侵入腸道的外組織或器官時, 可引起腸外感染。某些血寬顫清型可產生毒素, 為致病性大腸埃希氏菌, 可引起人類腹瀉。所以生活飲用水中大腸埃希氏菌成為腸道疾病的重要致病菌之一。[2]
他們從屬范圍邏輯關系如下
《生活飲用水衛生標准》2006版標准, 增加了生活飲用水中大腸埃希氏菌的檢驗。
為了提高實驗室檢測能力，近日，本實驗室開展了生活飲用水中大腸埃希氏菌檢測的質控活動，質控活動達到如下目標：
一、使用工作中分離的耐熱大腸菌群、標准菌神雹株產氣腸桿菌、標准菌株大腸埃希氏菌三種菌進行試驗，觀察不同大腸菌群在EC-MUG培養基熒光實況，取得陽性標本熒光視覺效果。
二、使用的試管進行酸浸泡、蒸餾水處理和水龍水直接清洗處理，尋找大腸埃希菌熒光效果影響因素。
三、使用北京陸橋EC-MUG培養基試劑及青島海博EC-MUG培養基試劑進行比較試驗，評價實驗室常規使用的試劑是否優良。
1材料與儀器
1.1 EC-MUG培養基, 購自北京陸橋有限責任公司、青島海博
1.2伊紅美蘭培養基, 購自北京陸橋有限責任公司。
1.3營養肉湯，購自北京陸橋有限責任公司。
1.4培養箱, 36℃ ±1℃;44.5±0.5℃;波長366nm紫外燈
2方法與結果
2.1方法原理
大腸埃希氏菌能特異性產生產生β -葡萄糖醛酸酶(β -glucuronidase), 此酶能分解培養基上的EC-MUG熒光底物釋放出熒光產物, 使培養基在366 nm紫外光下產生特徵性熒光, 以此技術來檢測大腸埃希氏菌。
2.2操作步驟與結果
上圖是產氣腸桿菌與大腸埃希氏菌在EC-MUG培養基經44.5℃培養後，在日光燈背景下，產氣腸桿菌液體清亮，說明產氣腸桿菌在44.5℃中不能生長繁殖；大腸埃希氏菌液體混濁，說明大腸埃希氏菌在44.5℃中能生長繁殖。
對上述經培養過的EC-MUG培養基，在日光燈觀察背景下，使用366nm紫外線燈進行觀察。產氣腸桿菌依然清亮，無藍光；不同稀釋度的大腸埃希氏菌菌液有明顯的藍光，藍光間無明顯差別。因此，在觀察大腸埃希氏菌發酵效果時，可以在普通光線下，使用366nm紫外線燈進行觀察，結果顯著。
上圖為在暗室下對前述經培養過的EC-MUG培養基觀察實驗效果。大腸埃希氏菌發酵後產生熒光，並且不同稀釋度的菌液，目視無顯著差別；與產氣腸桿菌效果陰性效果有非常明顯的差別。產氣腸桿菌培養管有微弱熒光，可能存在EC-MUG培養基自身有熒光事實！
該圖是滅菌蒸餾水與EC-MUG培養基效果比對。1、2試管是泡酸清洗的試管，5、6為未泡酸清洗的試管。
在暗室下觀察，產氣腸桿菌在EC-MUG培養管相對於蒸餾水，用手機拍照有明顯熒光，實際觀察中，這種熒光相對弱些，但依然是有熒光產生。所以，普通試管及蒸餾水可能產生的熒光可以忽略不計，但試劑本身產生有一定量的熒光是實驗事實。
因此，為了減少個人觀察經驗不足，建議，在實驗過程中，應該帶標進行比對觀察，這樣頭腦中才有熒光陰陽直觀效果。
上圖中的耐熱大腸菌群，是日常工作中檢出的工作株，實驗室證實他們在伊紅美蘭平板上能產生鐵銹色樣金屬光澤的大腸菌群，屬於耐熱大腸菌群。目前該菌在EC-MUG培養基經44.5℃培養後中也能混濁生長。
在日光燈背景下用三用紫外燈366nm紫外線波觀察，各個試管有微許藍光，實際目視觀察沒有很強。手機拍照顯示都有微量熒光效果，產氣腸桿菌顏色似乎還更深點。可以判斷全部10管試驗管均為大腸埃希氏菌陰性。
上圖為暗室下對產氣腸桿菌和工作株的耐熱大腸菌群在EC-MUG熒光效果圖。手機拍照顯示有較強熒光，實際目視效果較弱，如沒有陽性對照比較，易誤以為大腸埃希氏菌陽性結果。但在暗室下觀察，該耐熱大腸菌群、產氣腸桿菌沒有差別，也可以判斷為結果陰性。
通過產氣腸桿菌與實驗室耐熱大腸菌群在EC-MUG高溫培養後的熒光效果比較。產氣腸桿菌在高溫中不能生長，液體清亮，也不能分解熒光底物。本實驗室工作株耐熱大腸菌群能在高溫中生長，所以液體混濁，但本次工作菌株不分解分解培養基上的MUG熒光底物釋放出熒光產物，通過與產氣腸桿菌（商品標准菌株）比較，判定為熒光陰性，因此可能本實驗室該耐熱大腸菌群工作株是耐熱克雷伯菌屬。（耐熱大腸菌群，又稱糞大腸菌群，它由埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬組成。非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語。）
以下圖片為兩種不同試劑用相同處理的試管進行EC-MUG培養觀察效果：
暗室下觀察熒光效果圖，北京陸橋產品陰陽對照明顯。
日光燈下，用紫外線燈觀察熒光效果圖，北京陸橋產品陰陽對照明顯。
暗室下觀察熒光效果圖，青島海博產品陰陽對照明顯。
日光燈下，用紫外線燈觀察熒光效果圖，青島海博產品陰陽對照明顯。
上圖為正常光線下的實驗培養結果照片。
通過北京陸橋、青島海博兩種試劑的比較，兩種試劑在不同方式處置的試管內培養大腸埃希氏菌，稀釋倍數不同，產生的熒光效果是一樣的。
3.討論
3.1、有關文獻及實驗結果中，試管本身會產生微量熒光[3]。本次實驗使用的試管分兩部分，一部分是用酸浸泡試管七天以上，然後進行蒸餾水清洗；另一部分是直接用水龍頭水直接清洗，兩類試管均165℃2小時以上高溫滅菌。兩類試管分別均分裝有蒸餾水對照、產氣腸桿菌（標准菌株）、耐熱大腸菌群（工作菌株）、大腸埃希氏菌株（標准菌株）。同一菌株在不同方法處置的試管，實驗效果無差別，說明一般試管可能產生的熒光對實驗沒有影響。
3.2、EC-MUG培養基試劑本身經培養後會溢出一定的熒光物質，如果沒有陽性對照作比較，可能會誤以為是真陽性，造成假陽性結果。因此，初級實驗者或日常工作中，應帶標准菌株同步實驗並觀察實驗結果。
3.3、兩家試劑廠家生產的EC-MUG培養基，陽性結果產生熒光效果均顯著，實際操作中，日常生活飲用水中的大腸埃希氏菌試驗結果與陰性對照相差無異時，可以按未檢出大腸埃希氏菌結果進行報告。
3.4、GB/T5750.12－2006檢測大腸埃希氏菌有多管發酵法、濾膜法，大腸埃希氏菌酶底法。推薦的第一法為多管發酵法，是在檢測總大腸菌發酵乳糖蛋白腖基礎上，有選擇地進行EC-MUG培養，從批量工作中，減少了工作量及工作經費。在日常生活飲用水監測中，第一法相對第二法過濾法更簡便易行；相對第三法酶底法來講，更經濟實惠。因此，第一法多管發酵法，在常規檢測工作中仍是值得推廣的方法。
3.5、不同稀釋度的大腸埃希氏菌液在EC-MUG培養液中，產生熒光效果無顯著區別。因此，總大腸菌發酵後，在下步實驗操作中，移液管要一管一用，不同發酵管不能出現交叉污染，防止陽性值偏高。
參考文獻
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F. 飲用水的微生物污染可以用什麼為指示菌
（1）大腸桿菌培養過程要考慮：營養條件、溫度、酸鹼度等條件．大腸桿菌具有體積小、結構簡單、變異類型容易選擇、易培養、繁殖快等優點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料．
（2）微生物培養操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養基和培養皿進行滅菌．紫外線能使亂弊蛋白質變性，還能損傷DNA結構，故用來消滅空氣中細菌．
（3）稀釋塗布平板法計數活菌的個數，要對待測樣品中陪腔適度稀釋，避免菌體重疊，影響計數．
（4）可以根據菌落的形狀、大小等菌落特徵對細菌進行初步的鑒定或分類．
（5）使用過的培養基及其培養物必賣衫須經過滅菌處理後才能丟棄，以防止培養物的擴散，造成細菌污染．
故答案為：
（1）溫度 酸鹼度 生活周期短
（2）滅菌 損傷DNA結構
（3）適度
（4）鑒定（分類）
（5）滅菌