Ⅰ 已经去世了很久的那些生物的DNA是怎么提取出来的比如一些动物,只剩下骨骼什么了的。
通过钻取骨粉提取其中的DNA,但是由于细菌等微生物的作用,其中充满了其他生物的DNA ,那有什么方法区分呢比如人骨目前的方法是,从古代人骨头钻取骨头内部污染较少的骨粉,分离出DNA,此时的DNA是各种生物DNA的混合体,接下来技术人员会利用现代人类的一个DNA链作为探针去吸取古人类的DNA,由于微生物和人类DNA差别很大,易于筛选重复多次即可获得古人类的DNA另外一种方法,工作量就比较大了,就好比找未知生物一样,把其中的所有DNA序列都测一遍,和数据库内已知的相互比对,多次重复作业,基本可以确定物种,前提是已知物种,工作量比较大
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Ⅱ 从鼠中提取DNA一般用什么方法(血中,鼠尾,特异
从鼠中提取DNA一般用什么方法
获取质量稳定的基因组DNA,提高模型动物的快速基因鉴定速度.方法:以鼠尾为实验材料,采用苯酚/氯仿法和改良煮沸法提取鼠基因组DNA;分别用紫外分光.
Ⅲ 生物实验中提取不同物种的基因组DNA的实验原理是什么
提取不同物种的基因组DNA的实验原理
不同物种的DNA提取方法
摘要 DNA作为遗传微粒,为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献,而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA的性质,而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能,进而使DNA的研究进入到了分子水平。然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的,到现在还是一个热门课题,为了研究其作用,就需要从各种物种中提取DNA,由于不同物种结构的复杂性不同,导致提取DNA的方法也是各不相同,为此,我整理了一些物种的DNA提取方法。
关键词:物种、DNA提取
1、 月季DNA的提取方法:之所以提取高质量的月季DNA有难度,是因为其体内富含多糖及多酚类的物质,在一般的DNA提取方法中,很难被分离,这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。为了解决这个问题,北京市园林科学研究所采取五种提取方法,在其最后的实验结果表明:Draper法提取月季DNA的纯度最高,完整性最好。
2、 大麦小孢子DNA的提取方法:要想分离提取小孢子的DNA,就需要降解小孢子壁,而小孢子壁由外壁和内壁组成,内壁主要由纤维素和果胶组成,这类物质能够被相应的酶所水解,而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物,化学物质非常稳定,到目前为止,还没有相应的酶可以水解。因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。对此,莱阳农学院展开了研究,他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。最后“DNA的提取”等一系列的步骤,在最后的统计结果中,发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果,而且DNA的得率和质量几乎一样。这也证明了上述两种方法是有效而可行的,当然在这个研究过程,首次采用超声波法进行破壁,收到出乎意料的效果,也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。所谓的CTAB,其中文名是十六烷基三甲基溴化铵,是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
DS酚-氯仿法、SDS高盐法、CTAB法3种方法作为比较,并对最后的结果进行了分析,得出了CTAB法是提取高质量海绵动物DNA的有效方法,并且提出了用乙醇固定海产动物能够帮助其DNA的提取更加快速和有效。
4、 北方土壤真菌DNA的提取方法:真菌作为分解者,在生态系统中扮演着无可替代的角色,同时是维持生态系统平衡的重要一员,要探究土壤真菌是如何影响生态系统以及相互之间的关系,最直接的方法就是提取其全部DNA,利用相关技术进行分析。但是,由于真菌的细胞壁是由大量的几丁质和多糖物质组成的,严重干扰DNA高质量的提取,为了顺利解决这个问题,中国科学院沈阳应用生态研究所的吴敏娜博士等人通过传统的土壤真菌DNA的提取方法进行了改进,并在具体的实验中得到了良好的效果。其改进方法的大致操作为-65℃~65℃冻融3次,纤维素酶、蜗牛酶和溶菌酶(6、3和1mg·ml-1)作用180min,2%SDS于65℃裂解30min。
5、 梨DNA的提取方法:由于梨本身含有大量的多糖和酚类,在提取过程中会干扰DNA的絮状沉淀,导致DNA的纯度受到影响。乌云塔娜等人围绕如何提高梨DNA高纯度提取的问题展开研究,通过7个品种的梨为实验材料,采用了SDS 法、CTAB法、SDS-CTAB法、改良的 CTAB法、高盐低 pH 值法、分步离心法6种方法进行实验,记录下各种方法提取到的DNA纯度和质量进行比较,表明分步离心法是提取梨DNA的最佳方法。
6、 亚麻DNA的提取方法:亚麻作为一种纯天然的纤维,具有吸汗、透气性良好和对人体无害等显着特点,在服装、纺织行业越来越受到重视,有良好的发展前景,许多农民也开始大量种植,然而由于亚麻的种植要求比较高,抗病性差,经常导致歉收。近年来,科学院研究发展的“花粉管通道技术育种”理论,可以将一些外源基因导入小麦、大豆一些作物中,以增强它
不同物种的DNA提取方法
摘要 DNA作为遗传微粒,为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献,而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA的性质,而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能,进而使DNA的研究进入到了分子水平。然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的,到现在还是一个热门课题,为了研究其作用,就需要从各种物种中提取DNA,由于不同物种结构的复杂性不同,导致提取DNA的方法也是各不相同,为此,我整理了一些物种的DNA提取方法。
关键词:物种、DNA提取
1、 月季DNA的提取方法:之所以提取高质量的月季DNA有难度,是因为其体内富含多糖及多酚类的物质,在一般的DNA提取方法中,很难被分离,这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。为了解决这个问题,北京市园林科学研究所采取五种提取方法,在其最后的实验结果表明:Draper法提取月季DNA的纯度最高,完整性最好。
2、 大麦小孢子DNA的提取方法:要想分离提取小孢子的DNA,就需要降解小孢子壁,而小孢子壁由外壁和内壁组成,内壁主要由纤维素和果胶组成,这类物质能够被相应的酶所水解,而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物,化学物质非常稳定,到目前为止,还没有相应的酶可以水解。因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。对此,莱阳农学院展开了研究,他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。最后“DNA的提取”等一系列的步骤,在最后的统计结果中,发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果,而且DNA的得率和质量几乎一样。这也证明了上述两种方法是有效而可行的,当然在这个研究过程,首次采用超声波法进行破壁,收到出乎意料的效果,也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。所谓的CTAB,其中文名是十六烷基三甲基溴化铵,是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
Ⅳ 如何才能获得尽可能完整的动物组织DNA
高中:
原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤:
1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢
4.过滤:取黏稠物
5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 min
6.过滤:取滤液。
7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5 min
8.DNA的鉴定:沸水浴5min
大学
DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。
3.DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. (2).阴离子去污剂法; 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态
(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
参考资料:www.biolife.com.cn/article.asp?news_id=320
Ⅳ 动物药的DNA是怎么提取的
是动物细胞吧= =,动物细胞破碎比较容易,以鸡血为例,在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水,同时用玻棒搅拌,过滤后收集滤液即可。然后可以利用DNA的性质进行提取,比如DNA不溶于酒精,但脂质和蛋白质溶于其中,DNA耐受高温、洗涤剂,DNA在0.14mol/L的Nacl溶液中溶解度最低。
具体做法:鸡血细胞(加蒸馏水搅拌)——过滤,收集滤液——加入2mol/LNacl溶液搅拌——边搅拌边缓慢加蒸馏水,用0.14mol/L的Nacl溶液析出DNA,过滤得到的溶液加2mol/LNacl溶液。/(或)60~75摄氏度下使蛋白质变性析出,过滤,收集滤液/(或)用固定化蛋白酶(如木瓜蛋白酶,也就是嫩肉粉)使蛋白质水解,过滤,收集滤液。
最后加冷却的95%酒精使DNA析出,(鉴定)二苯胺沸水浴(呈蓝色)。
以上纯手打!
Ⅵ 动物基因组dna提取运用什么方法
提取动物基因组DNA的方法有:酚抽提法、盐洗法、水煮法、甲酰胺解聚法、盐酸胍裂解法等等。
Ⅶ 动物肝脏中DNA的提取步骤是
操作
1. 称取猪肝8g,用匀浆器磨碎(冰浴),加入相当于2倍肝重的0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液,研磨三次,然后倒出匀浆物,匀浆物在4000r/min 下离心10min;沉淀中再加入25ml缓冲液,于4000r/min 离心20min;取沉淀。
2. 在上述沉淀中加入40ml 0.1mol/L NaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液、20mlCHCl3-异戊醇混合液、4ml 5% SDS使其终浓度为0.41%,振摇30min,然后缓慢加固体NaCl,使其浓度为1mol/L(约3.6g)。将上述混合液在3500r/min离心20min,取上清水相。
3. 在上述水相溶液中加入等体积冷95%乙醇,边加边用玻璃棒慢慢搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用滤纸吸去多余的乙醇,即得DNA粗品。用蒸馏水溶解并定容至50ml,用二苯胺法测定DNA含量。
4. 提纯将上述所得的DNA粗品置于20ml 0.015mol/L NaCl-0.0015mol/L 柠檬酸三钠溶液中,加入1倍体积的氯仿-异戊醇混合液,振摇10min,离心(4000r/min,10min),倾出上层液(沉淀弃去),加入1.5 倍体积95%乙醇,DNA即沉淀析出。离心,弃去上清液,沉淀(粗DNA)按本操作步骤重复一次。最后所得沉淀用无水乙醇洗涤2次,真空干燥。