如何分离和鉴定动物病毒

㈠ 口蹄疫病毒怎么分离与鉴定

应用细胞培养、电镜观察、反向间接血凝试验、RT�PCR及测序技术对FMD疑似组织病料进行分离鉴定，确定其血清型及基因型。结果显示,分离鉴定的FMD疑似组织病料为O型Cathay口蹄疫病毒株。

㈡ 病毒毒株是怎么分离的

病毒毒株分离就是用含病毒的标本材料接种到适合的细胞里面。在这过程中要保证绝对的无菌环境操作，排除各种杂菌和其它微生物的污染。所以，一个有资质的、绝对干净，无污染的实验室和保证安全洁净的标准操作是整个流程的关键点。

成功分离出新型冠状病毒毒株的浙江省疾控中心微生物检验所所长张严峻：我们从病人痰液标本里面给它(新型冠状病毒毒株)处理了以后，接种到相应的细胞里，(让)这个病毒在细胞里能够生长。到了1月24日，我们对培养物进行鉴定，病毒已经在细胞里增殖，说明这个病毒培养分离已经成功了。

不是随便一个实验室都具有分离培养新型冠状病毒的资质，要有这个资质，至少要有生物安全三级实验室，而且实验室人员资质、工作流程、污染物的处理都要通过严格的审核，同时对于每一种高致病性病毒分离培养活动，都要专门向国家卫生健康委员会提出申请，经过审核后才能开展特定的分离和培养活动。

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分离病毒毒株的意义

这能知道病毒是通过什么样的途径侵入到人体当中怎样的细胞器官里去的、在人体里面是怎么样繁殖的、哪些部位会产生一些毒粒、这些毒粒怎样作用于人类让人类生病、最后这个病毒怎样排出来再去感染人。通俗说可以知道它是谁、它到底要到哪里去、去的哪个地方它到底要做哪些事情、做完坏事情之后它又怎样逃出来到另外一个地方去干同样的坏事，整个过程都可以给它弄清楚。

了解了整个过程之后，医药专家就可以针对性地去研究相应的药物和疫苗，对病毒的预防、治疗有着重大意义。

㈢ 病毒鉴定常用方法有哪些

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。
开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
（一）临床标本检测。
1．病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。
（1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
（2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
2．血清学检测
（1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。
（2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。
（二）媒介标本检测。
1．标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。
2．病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
3．病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。

㈣ 病毒DNA提取技巧

以下是从动物病毒中快速提取DNA的方法，请参考该方案采用离心操作，适合于从动物组织样品中快速提取病毒基因组DNA。以下步骤都在室温下进行。 1． 取50-100mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆，充分匀浆后10,000rpm离心2min去除残余组织。 2． 取150 μl上清液至新的洁净离心管中。 3． 加入500 μl DNA提取液至上清液中，颠倒混匀，室温静置5-10min裂解病毒。 4． 把DNA吸附柱装在2ml收集管中，把裂解后的液体全部转移至DNA吸附柱中，10,000 rpm离心1 min。 5． 倒弃滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，加入400 μl洗涤液至DNA吸附柱中，10,000 rpm离心1 min。注：洗涤液初次使用前请先加入48 ml无水乙醇。使用完立即盖上盖，以防乙醇挥发。 6． 重复步骤5。 7． 倒弃收集管中的滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，10,000 rpm离心3 min。 8． 把DNA吸附柱装在新的洁净离心管中，加入30-50 μl洗脱液至吸附柱中央，静置1-2min，10,000 rpm离心1min，所得即为DNA溶液，可用于后续实验，若暂时不用，应于-20 ℃可储存。

㈤ 发生禽流感后如何采集分离病原及运送病料样品

诊断很大程度上依赖于样品的质量、样品在进行实验室处理前的储存和运输过程的情况。用于细胞培养、鸡胚接种、直接检测病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的样品，应在流感症状出现的开始3天进行采集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳动物及禽类上呼吸道采集的样品适合用于流感病毒的鉴定和诊断。上呼吸道拭子分为鼻棉拭子、喉棉拭子和气管棉拭子三种。已屠宰或已死亡的哺乳动物应在下呼吸道采集样品，样品分为气管棉拭子、支气管棉拭子、肺组织等三种。禽类样品采集的部位应集中在呼吸道和大部分的消化道，采集的病毒样品种类包括泄殖腔棉拭子和粪便，其中泄殖腔棉拭子可从活体鸡或剖杀的鸡群中采集，从鸡舍或环境中采集粪便样品是常用的采样方法，但其具有不能准确确定样品来源的缺点，如果怀疑死禽体内含有高致病力的禽流感病毒，还应采集有代表性的内脏器官如脑、脾脏、心脏、肺脏、胰腺、肝脏和肾脏以及呼吸道、消化道等部位的样品。

如果想通过对感染细胞进行免疫荧光染色的方法直接检测病毒，那么采集的病料应放在冰浴中，在1～2小时内进行样品处理。用于分离病毒的样品，采完样后应立即将病料放在冰箱中冰冻，并尽可能早地接种于敏感细胞或鸡胚。如果样品不能在48～72小时内处理，应冷冻在-70℃或以下。如果装样品的试管没有被密封，或者装样品的塑料袋封闭不严，则样品不能放在干冰中运输或储存。因为干冰接触到病料样品后，能很快地灭活其中可能存在的流感病毒。

采集的样品应放在适宜的运输缓冲液中才能确保病毒的分离。目前已有一些适用于不同病毒样品的运输缓冲液，例如Hanks平衡盐溶液、细胞培养液、磷酸盐缓冲液、胰蛋白胨—磷酸肉汤、犊牛肉汤和蔗糖磷酸缓冲液等，在这些运输缓冲液中应添加0.5%～1%的蛋白质，例如牛血清白蛋白、明胶，还应添加抗生素以防止细菌的生长。

㈥ 如何利用实验动物接种样本分离培养病毒

实验动物在病毒学研究中有四方面用途：①分离鉴定病毒，如乙脑病毒；②连续传代通过，以减弱有毒株对人的致病力，如狂犬病病毒；③制备抗血清；④病毒致病机理的研究。
常用的实验动物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、绵羊、鸡、猴等。在病毒学研究中，动物接种时为避免动物本身可能带有病毒，多采用实验室自己繁殖的动物。首先根据研究目的选择动物种类，对病毒致病机制的研究，则选择愈接近人类的高等动物（例如灵长类）研究结果愈有价值；其次要注意动物的年龄、性别和接种的途径等各种因素，一般年幼的动物比成年动物对病毒的敏感性高。至于接种的途径应根据病毒的嗜性决定，例如脑炎病毒以脑内注射最敏感。

㈦ 怎么进行动物病毒毒株的筛选，只要求解释基本原理和过程，谢谢！

可以改变培养基的成分，例如PH值，营养物质，温度等条件。要看这种动物病毒适合什么条件。比如这种病毒适合在含氮的培养基里生存，而其他病毒不适合。那就以这个含氮的培养基为唯一氮的来源。来筛选。

㈧ 如何从发病动物中分离病毒

细胞破碎，离心，病毒都在上清里。