如何制备动物细胞悬液

‘壹’ 动物细胞工程中，制成细胞悬浮液后 接着该如何进行原代培养和传代培养

取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶处理（消化），处理形成单个细胞，将单个的细胞放入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，我们将培养10代以内的培养称为原代培养。10代以后的称为传代培养。培养10~50代的细胞称为细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的细胞被称为细胞系。

‘贰’ 0.5% 鸡红细胞悬液怎样配制

0.5% 鸡红细胞悬液怎样配制
0.5％红细胞悬液的制备：取全血1ml,加等渗盐水2 3ml,充分 摇匀离心沉淀,弃去上清液,然后再加生理盐水2 3ml 按上述方法洗涤,共三次.100ml生理盐水加0.5ml红细胞（离心后沉淀的血）=0.5%

‘叁’ 贴壁细胞计数的细胞悬液如何制备

可以用细胞培养液来稀释
当然要吹打了
一般来说25平方厘米方瓶20毫升液就够了
加液的多少主要是为了稀释和计数时计算用的。
没有具体的规定。

‘肆’ 制备兔血红细胞悬液为什么要用0.75的生理盐水

制备红细胞悬液的程序一般是用生理盐水洗涤红细胞，除去其表面的附着物，然后配成所需要的浓度。
洗涤红细胞的具体方法是：
先将抗凝血以2000r／min离心5min，吸去血浆层。在管中加2～3倍的生理盐水用毛细滴管轻轻地反复吹吸混匀，再以2000r／min离心5min，弃上清液，如此反复三次。最后一次可适当延长离心时间至10min。这样压积后的红细胞，上清液透明无色。弃上清液后，用压积红细胞配成实验要求所需的浓度备用。红细胞洗涤次数不宜太多，以三次为宜，否则红细胞脆性增加，影响试验结果。
若是用于制备溶血素的红细胞，应无菌操作。

‘伍’ 在动物细胞工程中，常常需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对动物组织进行处理，使之分散成单个细胞以制成细胞悬

动物组织的细胞之间相连的物质的化学本质是蛋白质，所以用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对动物组织进行处理，使其水解成小分子物质，从而使动物组织分散成单个细胞以制成细胞悬液．因此，胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用于蛋白质中连接两个氨基酸分子的化学键即肽键．
故选：C．

‘陆’ 动物细胞培养的基本过程

一、准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。

取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

(6)如何制备动物细胞悬液扩展阅读：

进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

‘柒’ 在动物细胞培养过程中,先后两次用胰蛋白酶,配制成细胞悬浮液,其作用分别是

第一次作用是洗掉原培养基吸附在细胞上的残留血清等物质，充当洗换液的作用，其实可以用其他溶液替代，比如PBS、hank`s、edta等，因为原培养基中残留血清会钝化胰酶，所以应当洗去；第二次用胰酶的的作用就是消化细胞，从而得以制得细胞悬液。

‘捌’ 大肠杆菌的菌悬液怎么制备

先把菌液稀释一定浓度后再用细胞计数板来确定菌浓度
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。
具体操作：
1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。
2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。
3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：
细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104
说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）

‘玖’ 如何获得细胞悬液

植物组织离体培养,获得愈伤组织,之后可用相关的纤维素酶等进行酶解或是进行液体悬浮系组织培养在进行酶解,就可以得到单细胞悬浮液,一般用液体培炎的悬浮液酶解效果较好.