肝纤维化的动物模型有哪些

⑴ 什么是肝纤维化如何治疗

自20世纪70年代中期开始，根据中医理论及临床经验，开展中医药防治肝硬化及抗肝纤维化治疗研究。迄今的研究表明，中医药抗肝纤维化治疗具有明显的优势。
1．强肝软坚汤（韩经寰，1979）益气健脾利湿、养阴活血散结。由黄芪、白术、茯苓、生地黄、白芍、丹参、当归、郁金、牡丹皮、栀子、鳖甲、茵陈等组成。采用四氯化碳腹腔注射制备大鼠肝硬化模型，以自体肝活检的方法进行了3年的实验研究。经长时间治疗后，肝硬化固有的形态学特征已消失。而对照组动物在停止注射四氯化碳1年后虽有一定程度的恢复，但以后又有恶化倾向，直至2年半后仍呈现肝硬化的病理特征。
2．复方861（又称复方丹参合剂，王宝恩等）由黄芪、丹参、鸡血藤等10味药物组成。临床治疗慢性乙型肝炎伴肝纤维化患者，坚持服药半年以上的49例患者治疗后症状改善率67％，血清P-Ⅲ-P及层黏蛋白含量较治疗前显着下降；ALT活性的恢复正常率达73％，有33％的患者门静脉管径缩小，脾大的回缩率为52％。用该方制成的冲剂治疗慢性乙型肝炎，每次1袋（含生药8克），1日3次，连用6个月。12例于治疗前后做2次肝活检，肝组织学炎症计分由治疗前的1825±207降至治疗后85±27，纤维化计分由100±992下降至298±207；而对照组治疗前后无改变。治疗前肝组织炎症区域有较多a-SMA阳染的肌成纤维细胞，治疗后显着减少。

⑵ 肝硬化可以用自体干细胞移植吗

干细胞是一类多潜能的、可高度自我更新的细胞，它们不但能自身分裂，还可以创造出新的细胞，以及比母代细胞分化能力更强的祖细胞。已有的研究结果显示：干细胞可以用于治疗多种疾病如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化、糖尿病以及自身免疫性疾病等。由于干细胞具有多能性和供应无限制性，致使其拥有广泛的应用前景。

目前，肝移植是治愈终末期肝病的唯一手段，但这一治疗对绝大多数患者而言是可望而不可即的。随着干细胞领域不断传出的好消息，它也为终末期肝病的根治性治疗带来了契机。

已有的研究证实：骨髓间充质细胞移植治疗严重肝损伤的动物模型，能明显改善动物的肝功能、肝纤维化程度以及生存率。国外研究结果表明：纯化的造血干细胞(HSCs)能够产生肝细胞，并治疗因肝脏损伤而导致致命性肝衰竭的实验鼠。那么，在肝脏疾病患者中，HSCs是否也能带来好消息呢？

外周血中现已鉴定的HSCs标记物主要为CD133+和（或）CD34+。血循环中的CD133+及CD34+细胞在组织或器官缺血后血管的再生过程中发挥了重要作用。CD34+是一类参与细胞黏附作用的糖蛋白，它还表达于脐带血干细胞、间充质干细胞、表皮祖细胞以及成熟的表皮细胞。

有国外学者对9位酒精性肝硬化患者注射骨髓源性的CD34+ HSCs治疗，结果发现该方法能有效改善患者肝功能Child评分。Salama等进行的临床随机对照研究中，140位病毒和自身免疫性终末期肝病患者行HSCs移植，其结果显示：患者血清白蛋白、胆红素及转氨酶水平均明显改善，从而认为自体CD34+和CD133+ HSCs移植可以用于对终末期肝病的支持治疗。当然，也有报道提示HSCs在肝脏损伤后的再生机制中作用有限。

肝硬化患者 生活质量可改善

HSCs与其他种类干细胞比较，有易于获得、可来源于自体而无须使用免疫抑制剂及成本低的优点，目前在血液疾病领域的应用已较为成熟。于是，我们决定研究晚期肝硬化患者在HSCs移植后肝功能及肝组织学变化。

我们收集了2010年7月~2015年7月收治的42名晚期肝硬化已达到肝移植标准的患者，行自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗，随访中位时间为57个月（1~60个月）。42名患者经自体外周血CD34+ HSCs移植治疗后，患者精神、睡眠、食欲、大小便情况及症状均有不同程度改善。10例患者发生术后并发症，其中术后1、3个月各发生肝肾综合征1例，均死亡，其余治疗后痊愈。42名患者5年生存率为95.23%，无1例发生肝癌。

移植后5年患者慢性肝病健康相关生存质量(HRQL)评分明显提高，患者术后5年肝功能Child评分及MELD评分均有明显好转。

患者生活质量改善，可能与患者食欲增加、腹水减少等肝硬化相关并发症的临床表现明显改善有关。这说明CD34+ HSCs移植对晚期肝硬化患者HRQL的改善是持久且稳定的。而Child与MELD评分在术后5年患者中均明显下降，说明CD34+HSCs可改善晚期肝硬化患者的肝功能及预后，以及患者短期死亡的预期明显降低。

肝组织学结构得到明确修复

肝硬化是以肝组织结构破坏和形态紊乱、再生硬化结节为特点的肝纤维化终末期表现。抗纤维化及组织重建在治疗终末期肝病中尤为重要，因此逆转组织学结构的病理改变是判断治疗效果的关键。

本组患者移植前常规行肝脏活检组织病理学检查，发现肝小叶结构紊乱，被纤维结构切割，肝细胞水肿变性，呈毛玻璃样变，有点状及碎屑坏死；可见汇管区一汇管区桥接坏死，汇管区内有纤维组织增生，假小叶形成。

移植后5年患者再次做肝组织活检显示，正常肝小叶形成明显增多，且分布更加趋近正常，肝细胞水肿变性，见少量点状坏死，未见明显碎屑坏死；汇管区内纤维组织增生较前明显好转，纤维组织明显减少，染色变淡。移植后5年患者Knodell肝硬化评分、HRQL评分与移植前比较，差异有统计学意义。这说明CD34+ HSCs可能在硬化肝脏的组织改建、修复及再生过程中发挥了重要作用。

对于肝病患者众多的我国来说，在肝移植难以普及，而人工肝尚未成熟的今天，干细胞移植应该成为第三种探索方向。当然，这一方法广泛应用于临床还有不短的距离。比如这一治疗方法的机制仍需进一步研究并明确；科学、统一的干细胞移植后疗效评价体系尚未建立，各评分系统在影响晚期肝硬化转归方面所占权重仍需研究完善等。

⑶ 什么是肝纤维化

肝纤维化是肝细胞坏死或损伤后常见的反应,纤维化可以由多种因素引起：任何破坏肝脏内环境稳定的过程,尤其是炎症,毒性损害,肝血流改变,肝脏感染(病毒,细菌,真菌,寄生虫)。许多先天性代谢障碍引起物质在肝脏贮积也与肝纤维化有关,包括脂质代谢异常(Gaucher病),糖原贮积症(尤其是Ⅲ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅸ和Ⅹ型),α1 ,抗胰蛋白酶缺陷,外源性物质的积累如铁过度负荷综合征(血色病),铜沉积病(Wilson病),导致毒性代谢产物堆积的疾病(如高酪氨酸血症,果糖血症,半乳糖血症),过氧化物酶异常(Zellweger综合征).许多化学物质和药物与肝纤维化发生有关(尤其是酒精,甲氨蝶呤,异烟肼,羟苯吲哚,甲基多巴,聚氯乙烯,甲苯磺丁脲,乙胺碘呋酮).肝内循环紊乱(慢性心衰,Budd-Chiari综合征,静脉闭塞疾病,门静脉栓塞)和胆汁流动阻塞也可导致肝纤维化。最后,肝纤维化也可由先天性异常引起。

⑷ 鼠肝的其他研究

大蒜素是强效抗氧化剂，目前国内外研究显示它能增强肝脏谷胱甘肽抗氧化系统功能，能拮抗乙醇氧化性肝损伤。本研究通过对肝脏病理学、超微结构、细胞外基质与肝纤维化相关指标的观测研究大蒜素对肝纤维化的防治作用。 1、材料：
SD大鼠46只，雌雄兼用，体重220-260g，由苏州大学实验动物中心提供。大蒜素微粒：江苏省靖江制药厂提供，批号：2001011.2。秋水仙碱：昆明制药有限公司，批号：980732，规格：0.5mg/片。二甲基亚硝胺(DMN)：上海开明化学厂生产化学纯，批号：0161072。酶联免疫检测试剂盒等均由上海森雄科技实业有限公司提供。
2、仪器：
①透视电子显微镜CH600，日本Hitachi。②酶标仪：Denley Dragon Wellscan MKI芬兰Lab systems提供。
3、方法
①动物分组：正常对照组(n=6)：予蒸馏水灌胃，生理盐水腹腔注射；模型组(n=8)：蒸馏水，DMN；小剂量大蒜素预防组(n=8)：予大蒜素11mg·kg-1·d-1，DMN；中剂量大蒜素预防组(n=8)：予大蒜素22mg·kg-1·d-1，DMN；中剂量大蒜素治疗组(n=8)：予大蒜素22mg·kg-1．d-1，DMN；秋水仙碱组(n=8)：予秋水仙碱0.15mg·kg-1．d-1，DMN。给药方法：用生理盐水将DMN配成0．5%的溶液10mg·kg-1·次-l腹腔注射，第1周每天1次，连续3d，第2～4周每周1次，第5、6周均每天1次，连续2d，实验结束后腹主动脉取血制备血清。采血后取肝脏左叶常规固定备用。将大蒜素用蒸馏水分别配成相应浓度，按10m1·kg-1．次-1灌胃给药。除大蒜素中剂量治疗组在模型建立3周后给药，余各组在建模开始时同时给药。②观测指标及方法：检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白，I型前胶原肽(PINP)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)和透明质酸(HA)检测采用双抗体夹心ABC-ELISA法。层粘连蛋白(LN)检测采用酶联免疫竞争法。肝组织HE染色及胶原纤维(V-G)、网状纤维特殊染色(Gommori)。 1、大蒜素对大鼠肝纤维化模型肝功能影响：模型组血清AST和ALT活性明显增加，分别为正常对照组的1.7倍(p<；0.01)和1.5倍(p<；0.01)。大蒜素抑制DMN所致的上述改变，可使血清AST和ALT活性完全恢复正常，并能提高血清白蛋白含量，而秋水仙碱则无降低AST、ALT及升高血清白蛋白含量作用(p>；0.05)。
2、大蒜素对大鼠血清纤维化指标的影响：模型组LN、HA、P工NP、PⅢNP较正常组明显增加(p<；0.05)，大蒜素小、中剂量预防组、中剂量治疗组LN、PINP、PⅢNP较模型组明显下降(p<；0.05)，其中大蒜素中剂量预防组对降低HA、LN、PINP、PⅢNP作用最大。秋水仙碱组仅对LN、PⅢNP减少作用显着。
3、大蒜素对肝组织病理学影响：HE染色、Gommori、V-G染色均显示大蒜素预防和治疗组与模型组相比，可明显减轻纤维化等级及SSS分值。
4、光镜结果：正常组：肝小叶内网状纤维支架完整，分布规则，无胶原纤维存在。模型组：肝细胞变性坏死，肝小叶结构破坏，纤维组织增生，假小叶形成。大蒜素组：中央静脉周围可见纤维组织，未见明显假小叶形成。
5、电镜结果：模型组肝细胞萎缩，线粒体固缩或肿胀，细胞内见大量脂滴及空泡样变，小胆管扩张，胆管上皮增生，微绒毛减少。Disse间隙见多处纤维沉积，肝窦内皮细胞的窗孔消失，内皮细胞下基底膜形成。大蒜素组Disse间隙纤维化明显减轻，其中中剂量大蒜素组接近正常。 研究发现大蒜素对四氯化碳诱发大鼠肝损伤引起的AST和脂质过氧化产物丙二醛水平的升高有明显的抑制作用，这种作用具有剂量效应关系。
血清LN、HA、PINP、PⅢNP是检测肝纤维化可靠的血清学指标。其中LN、PⅢNP在肝纤维化过程早期出现，常与肝细胞的炎症坏死有关，尤其是LN参与形成肝窦内皮细胞基底膜。而HA、PINP在肝纤维化过程晚期出现，可作为衡量药物抗肝纤维化效应指标。本组结果示大蒜素各组PINP、PⅢNP、LN均低于模型组，表明其肝内合成纤维受到抑制，肝组织学显示大蒜素可降低肝纤维化等级及SSS分值。其中以中剂量预防组效果最好，电镜观察同样显示大蒜素各防治组Disse间隙及肝窦纤维沉积及抑制内皮细胞基底膜形成较模型组明显好转。提示大蒜素对实验性肝纤维化具有一定的预防和治疗作用。
大蒜素抗实验性肝纤维化的可能机制为：①大蒜素具有良好的抗氧化作用。肝细胞损伤可产生脂质过氧化产物如丙二醛等激活肝星状细胞(HSC)合成胶原。抗氧化治疗有利于减轻肝损伤和肝纤维化。本实验在DMN造模大鼠中观察到肝功能改善，提示大蒜素可通过抑制脂质过氧化而对肝损伤及纤维化起抑制作用。②间接抑制HSC细胞转化。HSC在肝受损时被激活，转化成肌成纤维细胞(MFBLC)。
研究认为，大蒜素由于其抗脂质过氧化(LPO)作用使血管内前列腺素(PG)I：明显增加，PGI：能抑制血小板衍生生长因子(PDGF)激活的DNA合成而抑制血管平滑肌细胞增殖。大蒜素可能通过抑制PDGF激活的DNA合成而抑制HSC的增殖。③大蒜素还能提高纤维蛋白自溶解活性，从而使纤维蛋白降解产物(FDP)增加。本组设立治疗组，在肝纤维化造模3周后给药，结果表明大蒜素治疗组肝脏病理组织学检查及胶原蛋白含量与肝纤维化模型组差异有显着性，说明大蒜素可能具有促进胶原蛋白降解与胶原纤维重吸收的作用。