动物细胞培养后的细胞如何收集

① 动物细胞培养的注意事项

原代动物细胞培养：
1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。
2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。
3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。
贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。
4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。

传代细胞培养：
1、无菌操作
2、控制消化时间
3、及时关注细胞生长状态

② 动物细胞培养的基本过程

一、准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。

取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

三、培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。

细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

四、冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

(2)动物细胞培养后的细胞如何收集扩展阅读：

进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。

③ ATCC细胞培养主要有哪些流程

为了能够在ATCC细胞培养实验中成功使动物细胞完好的生长繁殖，人们应在开展细胞培养实验时提前做好充足的准备工作，从而能够避免由于准备工作的不到位以及对某一环节的疏忽导致实验出现无法进行的情况，事先了解清楚动物细胞培养的主要流程则具有关键作用。那么，高质量的动物细胞培养主要具有哪些流程？
一、准备工作。人们在开展动物细胞培养实验时应做好充足的实验相关物品准备工作，不仅要对实验器皿进行全面的清洗、干燥和消毒工作，而且还应对培养基与其他相关试剂进行配置、分装和灭菌工作，同时还要对实验室的操作台进行清洁和消毒工作，从而保证实验物品能够不受细菌等物质的污染。
二、取材。当人们完成好动物细胞培养实验的准备工作后则应进行取材工作，在这一流程中需要要求在无菌的环境下提取出动物细胞并经过一系列的处理工作后接入培养器皿中，为了避免接触到有害物质影响实验的成功率应保证在无菌的环境中完成取材工作。
三、培养。为了使动物细胞快速食物进入到生长状态中，人们在进行动物细胞培养实验的培养过程中应将取得的动物细胞接入专用的培养器皿中，同时在培养过程中还应仔细观察以及记录好动物细胞每个阶段的生长状况。
四、冻存和复苏。在动物细胞培养的冻存和复苏这个流程中，为了使实验获得的细胞能够保存好应进行冻存工作，并且在将细胞收集到冻存管中还应注意加入含有保护剂的培养基中，如需要将冻存的细胞进行复苏时则将从液氮中取出的冻存管放入与人体体温相接近的温水中即可。
以上内容就是高质量的ATCC细胞培养主要具有的流程，通过做好准备工作、取材、培养以及冻存和复苏等四个流程，选择在售后好的动物细胞培养专业机构在进行实验不仅能够有效提高动物细胞培养实验的成功率而且还能够提供较专业的技术指导以及操作环境。
CCR-2B 血管生成素-1抗体
CCR-3 血管内皮细胞粘附分子抗体
CCR-4/CD194 血管内皮细胞粘附分子抗体
CCR5 血管内皮细胞生长因子受体-3抗体
CCR6/CD196 血管内皮细胞生长因子受体3抗体
CCR7/CD197 血管内皮生长因子受体相关蛋白抗体
CCR8 血管内皮生长因子受体2抗体
CCR-9 血管内皮生长因子受体1抗体
CCRK 血管内皮生长因子抗体

④ 培养的动物细胞通常取自什么样的组织或器官

（1）动物胚胎或幼龄动物的组织、器官代谢旺盛，分裂能力强，故可作为动物细胞培养的材料．
（2）容器A的动物器官或组织首先要进行的处理是剪碎，然后用胰蛋白酶处理，这是为了使细胞分散开．这样做的目的是使每个细胞能与培养液接触．
（3）培养首先在B瓶中进行．瓶中的培养基成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等．在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第10代，到这时的培养称为原代培养．
（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用胰蛋白酶处理，然后配置成细胞悬浮液，再分装．
（5）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是细胞没有发生癌变．
故答案为：
（1）动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
（2）剪碎 胰蛋白 使每个细胞能与培养液接触
（3）葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 10 原代培养
（4）胰蛋白酶 细胞悬浮液
（5）细胞没有发生癌变

⑤ 动物细胞培养的一般步骤是什么 动物细胞培养的步骤简介

1、复苏，把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。3天换一次培养基。

2、传代，培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。把原有培养基吸掉。加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

3、冻存，把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。冻存液的配制：70%的完全培养基 20??%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

⑥ 细胞培养后如何收集

悬浮的细胞，将培养液转移至离心管中，然后离心，留在下面的是细胞。
贴壁的细胞，一般用含0.25%EDTA的胰酶消化1-3分钟，需要实时观察，待细胞间隙变大回缩时加培养基终止消化，然后进行吹打，最后离心收集细胞。

⑦ 动物细胞的培养

.动物细胞培养液的成分：体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
2.动物细胞培养液的特点：液体培养基、通常含动物血清。
3.动物细胞培养的条件：
①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
②营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等） 。
③血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份) 。
④温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4） 。
⑤气体环境（95%的空气+5%CO 2的混合气体） 。
其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定 。
3.基本过程
取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的细胞被称为细胞系。 培养基添加胰岛素可促进细胞对葡萄糖的摄取。
与植物细胞的区别
1.培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基） 。
2.培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要。
3.产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。
4.原理不同：植物组织培养的原理为植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理为细胞的增殖。
5.过程不同：植物组织培养的过程为脱分化和再分化，动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养。

⑧ 为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种,分离法

实验:细胞培养

1.实验目的

初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。

实验原理 2.

从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。