1. 细胞传代后不贴壁了,成团浮在培养基里,怎么办
看下培养液颜色念拆裂,是不是要更换培养御盯液了,做下活性检测,看是不是有污染,细胞是不是死了。细胞和人一样,环境不舒服的时候就会表现出来的,养细胞是个细心活,慢仔闭慢来
2. 细胞消化成团怎么回事细胞还没用胰酶消化,用PBS洗时,就有大量的细胞脱落下来,是怎么回事
细胞禅洞消化成团个人认为是和消化酶磨袭烂有关,消化酶是否保存不当(主要为温度)并且时间过长失去了消化活性(可瞎漏以做酶活测定),或者酶的浓度配的不合适,在允许范围(防止消化过度损伤细胞)内适当加大酶液量。以上是某f发表的一些浅见解。关于第二个有大量细胞脱落,我想是没有做好及时的细胞传代,细胞汇合80%(理想)就应该进行传代,因为在培养过程中,培养基积累了大量的细胞代谢产物,导致培养基的成分,PH值发生变化,继续培养下去是有害的:营养成分不足+代谢产物堆积导致贴壁细胞脱落死亡,因此即便你好没有进行传代前的消化作用,已经有部分死亡的细胞脱落下来了(LZ君应该是有定时做显微观察,染色鉴定死活)
仍旧是某F的浅见- -,望指教
3. 液基细胞学怎么将成团的细胞散开
一般是槐滚用酶来处理,将细胞膜以外的成分分解掉,然后将细胞游离出来铅世余。当然,动物细胞,植物细胞和微生物细胞的处理方式各不相同,但原理差不多。如返老果是一些松散的细胞团体,则可以用轻柔的物理方法分散。
4. 细胞培养时细胞成团像网状怎么回事
主要原没橡因可能还是细胞质量问题枯早旁,本身代谢就慢或者脆弱;再一个可能跟培养过程中的维护有关系,细胞密度太低或者太高都会导致
细胞凋亡
,死亡的细胞睁做裂解物包裹未凋亡的细胞形成絮状物,这些絮状物在显微镜下看的话就是细胞聚集。
5. 动物造模细胞不匀能成功吗
能,DSS UC模型的优势
1、症状表现与人UC极度相似,可用于研究急、慢性结肠炎的笑答发生发展机制,也可用于药物的药效研究。
2、自由饮用DSS水溶液的建模方式,简单易行,成模率高,重复性强。
3、用不同浓度的DSS、给药时间和给药频率,可以实现急性和慢性两种结肠炎模型。模型持续时间长,体现了急性向慢性转化的动态过程姿凳,解决了UC的慢性化和维持问题,这是以前许多模型无法比拟的。
4、多种属动物中均可造模:小鼠、大鼠、斑马鱼、猪、果蝇等。
5、联合氧化偶氮甲烷 (azoxymethane, AOM)用药,碰册慧可用于诱发结肠炎相关性癌症 (colitis associated cancer, CAC) 动物模型,成功模拟IBD诱发CAC的过程。
6. 海马神经元原代培养细胞为什么会长成团
原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型,被广泛应用于心血管研究之中.我们实验室经过长期尝试,摸索出了一些行之有效的方法,并积累了一些经验,现总结如下:
1新生大鼠鼠龄的选择新生大鼠心肌细胞在出生后3 d内具有部分的增殖能力,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞,不再具有分裂增殖能力.因此,大鼠出生时间越短,其心肌细胞分离后成活率越高,越容易贴壁生长.大量观测表明,选择1~3 d龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想.其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳.
2消化酶的选择及使用
新生大鼠心肌细胞的分离可采用组织块法和消化法,前者因不易获得密度均一的细胞且难控制成纤维细胞的生长而较少采用.消化法中常使用的酶有3种:胰蛋白酶、胶原酶I或Ⅱ以及透明质酸酶.透明质酸酶多与胰蛋白酶或胶原酶联合应用.胰蛋白酶作用较强,容易造成心肌细胞损坏.胶原酶作用较缓散戚和,能消化细胞间质中的胶原纤维以释放细胞,对细胞损伤小,且在新生大鼠心肌组织,以胶原I为主,故我们选用胶原酶I.文献报道胶原酶的工作浓度一般在0.6~1 g・L1,我们使用的为0.8 g・L1.胶原酶最好现用现配.
3消化程度的把握
新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩,细胞死亡率增加或丧山衫失贴壁能力及搏动能力;消化不足,细胞聚集成团,无法分清细胞边界,难以形态学观测.消化过程中使用磁力搅拌器时应注意1)转速一般控制在60~80 r・min1左右.(2)每次消化的时间须结合消化酶浓度确定.(3)将粘附在搅拌子上的心肌组织吹散,使酶液充分接触组织.(4)适宜温度为35~37℃.(5)当组织由红转白呈半透明状态时,应停止消化.
4接种的细胞密度
心肌细胞接种密度不仅影响细胞间的相互接触,进而影响细胞对肥大刺激的反应,而且影响长期培养细胞的成活率.接种细胞的绝对数量应经精确计算.一般而言,应根据实验的观测目的决定单逗掘腔位面积上的细胞数量.例如,如作形态学观测,六孔板中每孔的接种细胞数量应控制在1×105~2×105个;若需收获心肌细胞作mRNA或蛋白表达水平的观测,则每孔的接种密度可增加到5×105~6×105个.
7. 细胞成团生长,消化后仍然成团,怎么办呢
你试试cell striper (成分就是EDTA)看看
8. 动物细胞模型制作方法
生物细胞模型的制作方法如下
1、准备一盒橡皮泥
2、制作细胞核,选取三种颜色橡皮泥形成对比(两层、有核孔、染色质)
3、烂灶制作叶绿体,选取一种颜色,注意细部构造(双层膜含基粒)
4、制作线粒体,双层膜一定要清晰可见(双层膜)
5、制作内质网(上有核糖体)
6、制作高尔此禅基体
7、制作中心体,中心体外观构造为T型。
8、放入橡皮泥小盒中,动物饥扒扮细胞制作完成
9. 细胞培养传代时细胞抱团怎么办
贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密举蠢拦单层后,继续生长的空间不足,培养基中的营养成份也消耗较多,同时代谢废物也档仿有较多堆积,需要分瓶培养,对细胞进行传代扩增。对于贴壁不太紧的细胞如293,可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO,则需要以胰酶消化后再吹散分瓶,一般过程为(以下操作均按无菌操作的要求进行):将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去;加入0.25%胰酶溶液,视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多,以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶壁半透明的细胞层,当见到出现细针孔空隙时,弃去胰酶溶液,并加入适量的细胞培养液终止消化;视实验要求分入多瓶继续培养,一般为一传二到一传四的比例。
这里,胰酶消化的程度是一个关键:消化过度则对细胞的活性损伤较大,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养正胡瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。以笔者的经验,以轻吹或加培养液后轻摇可下较好,但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。
10. 求助CIK细胞培养中的抱团问题
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者历闹肢企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎弯慧么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的肢世,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。