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动物药敏实验室要多久

发布时间:2022-05-10 07:45:24

A. 药敏试验的具体操作方法

1药敏实验操作步骤:在超洁净工作台内,先将灭菌好的培养基做好标记,无菌取病料(即:肝脏、心脏组织)一小块,轻轻在灭菌的培养基上涂布几下(不要突破培养基),然后用接种环再密集划线。然后,将制备好的药敏片分别按标记好的位置贴在培养基的表面。记录好培养皿的标记及药敏片的顺序。最后,将培养皿放入37℃恒温箱中培养8—12小时即可。
2药敏实验结果观察:培养好后会发现细菌再培养基上均匀分布,同时会看到药敏片周围有不同程度的抑菌圈。抑菌圈越大,说明该鸡群对这种药物越敏感;抑菌圈小或没有抑菌圈,说明该鸡群对这种药物不敏感或已经产生了耐药性。若在培养皿中出现一团一团的细菌时说明培养皿中有杂菌感染。

B. 学习细菌做分离鉴定药敏试验要多久

微生物学检查的方法临床微生物学实验室接到标本后应立即进行微生物学检验。主要包括直接镜检、检测特异性抗原或病原体成分、进行分离培养和鉴定、体外药敏试验等。(一)直接镜检标本经涂片染色或制备湿片镜检,有些标本如尿液、脑脊液等经过离心浓缩后镜检出其初步结果对有些病人标本有诊断参考价值。直接镜检对于确定进一步检出步骤及鉴定方法也很有帮助。另外,直接镜检还可评价标本是否符合检验要求。(二)快速诊断快速检测病原体成分主要是指特异性抗原和核酸检测。特异性抗原检测包括免疫荧光技术、胶乳凝集试验、酶免疫技术、对流免疫电泳、化学发光免疫测定等。核酸检测包括核酸探针杂交、PCR技术。其他快速检测法还有气-液相色谱法、化学发光、生物发光测定法和基因或蛋白微型阵列芯片技术等。(三)直接药敏试验直接药敏试验即在分离培养病原体的同时,直接将临床标本接种于平板,用抗生素纸片作药物敏感性试验,在18~24h内可获得结果。但因其在试验时接种量难以标准化,且对混有杂菌和混合感染的标本不易明确其结果,故分离出纯培养物后应再作体外药物敏感试验。(四)常规检验 1.分离培养:通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板,置于空气或含5%~10%CO2的气缸中培养,大部分细菌可于24~48h生长良好。若原始培养为阴性,但据镜检结果和临床信息提示可能有病原菌存在,则应再采集大量标本,离心浓缩或溶解离心法处理,取沉淀接种营养丰富的需氧或厌氧培养基来培养。对于存在正常菌群部位采集的标本,分离时应采用选择培养基以利于病原菌生长,也可加某些抗生素抑制污染菌的生长。对于某些感染标本中发现的细菌,如尿路感染的尿液中检出大肠埃希菌,可能是病原菌,也可能是污染菌或正常菌群,其临床意义的确定有赖于定量培养法。即取一定量的标本如液体标本用液体培养基作一系列稀释;组织标本称量后制成悬液,并稀释成l0-1,10-2,10-3等,分别取0.1ml涂布于血琼脂平板或倾注培养,35℃24h后计算每克标本所含细菌数。 2.鉴定:分离出的细菌一般应经过细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学试验、动物接种等鉴定。目前尚有某些微量鉴定系统,其鉴定快速、简便,值得推广。如用于鉴定肠杆菌科的20E,鉴定非发酵菌的20NE及鉴定厌氧菌的20A等。 3.体外纯菌药物敏感性试验:常用方法包括抑菌试验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。(五)报告直接镜检要求2h报告,说明标本是否合格,发现微生物情况和特点;初步鉴定和直接药敏结果于24h或次晨报告,报告可能的病原菌和直接药敏结果;最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3天,还规定除血培养外,所有送检标本必须在24h内预报。

C. 宠物猫疫苗怎么打

猫咪第一次接种疫苗称为首次免疫,首次免疫需要连续接种3针猫三联,每针的时间间隔是20-21天。
我们的猫咪在满3月龄之后,还需要接种狂犬疫苗。一般情况,第三针猫三联可以和狂犬疫苗一起注射,也可以隔一周之后再进行注射。
往后每年需要个加强一针猫三联和狂犬疫苗,称为年免。
接种疫苗后猫咪可能会有一些反应,下面我列出几点:
局部反应。少数宠物注射部位有疼痛、红肿、硬结、瘙痒、甚至水肿、淋巴结肿大等。
全身反应。有少部分接种宠物发生全身性的过敏反应,表现为精神极度沉郁或者极度亢奋,大面积荨麻疹、红斑、皮疹等症状;严重的话可出现急性过敏性休克。
如果对宠物健康方面有其他问题,24小时宠物医生在线问诊
新瑞鹏宠物医疗集团旗下宠物医院配备有核磁共振(MRI)、电子计算机断层扫描(CT)、动物专用血液透析仪、荧光定量PCR仪、内窥镜、超声乳化仪、手术显微镜及高清示教系统、数字化直接成像系统(DR)、彩色超声诊断仪、呼吸麻醉机等设备,分院还配置有ERP系统、HIS系统、PACS 专业远程影像系统,可实现远程诊断、远程教育、远程监督等,各区域中心医院还配置有药敏实验室和病理实验室,在瑞鹏基本上可以完成小动物常见临床疾病的诊断和治疗,为宠物带来健康保障,提升小动物卫生福利。

D. 猫猫疫苗是多久打一次

如果你的猫咪是从宠物市场上买来的,那么它需要先注射一针血清15—20元/针,如果是自己家养的猫咪则不用注射血清。在注射血清10天后接种两联或三联疫苗,两联疫苗15—20元,注射两次,相隔15天;三联疫苗为进口疫苗,60元/只,注射三次。以后每年打一次。
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E. 支原体药敏要多长时间

您好,药敏实验一般是较慢的。 指导意见: 药敏实验室通过培养解脲支原体然后加入药物进行抑制,这个时间一般需要3天左右。

F. 药敏试验和细菌培养需要多久

就是“病原体鉴定培养”和“药敏试验”。

其他非常好理解:一般人体感染,有细菌感染、病毒感染、真菌感染、支衣体衣原体感染。。。等等。

临床一般只能靠“估计”来用药。

当对于某些感染,用了很多药仍没有效果,那么就需要对所感染的细菌进行鉴定(看是何种细菌),并试验这个细菌对哪些药敏感(如果对某种药敏感,就采用这个药进行治疗,可以“有的放矢”,也不会“滥用”。
追问:
哦,那要在什么时候检查才准确呢?是月经过后的3~7天,还是什么时间都可以呀!谢谢
回答:
月经干净后3天以上就可以的.
追问:
哦,谢谢

G. 药敏试验的介绍

用药敏实验进行药物敏感度的测定,以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格,条件比较高,仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作,一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题,农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践,逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前,临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法,稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法),抗生素浓度梯度法(E-test法),和自动化仪器等。

H. 动物药敏试验中药物不敏感的原因有那些

兽医临床中的药敏试验
目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失,阻碍了养殖业的快速发展,所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药,细菌的耐药性问题正变得越来越突出,不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重,它不仅使抗菌药的疗效降低,疗程延长,死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失,而且药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类,对人类健康也造成潜在威胁。因此,临床上应合理应用抗菌药,以避免或减少耐药性的产生,而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药,以充分发挥抗菌药疗效,并尽可能减少其不良影响。
一、什么是药敏试验?
抗菌药物敏感性试验,简称药敏试验,是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验,测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用,以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁,有助于经验性治疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能,也是使用抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。

二、药敏试验的意义
1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性,指导临床合理用药。因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药敏,不需要生物载体,不需要实验动物,操作相对简单,成本相对降低。是一种既经济又有效的方法。
2、可以对流行病学调查进行监控,控制和预防耐药菌株的流行。因为随着新型致病菌的不断出现,各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同,同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株的耐药性,对流行病学调查建立监控,同时采取相应的措施也就可以控制和预防耐药菌株的流行。
3、为临床用药提供参考依据。因为一个正确的药敏试验结果,可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。长期以来,由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消失。不能很好的掌握药物对细菌的敏感程度,不但造成药物浪费,而且还延误病情,给养殖户造成了很大的经济损失。近十几年,在肉鸡生产中,为了控制大肠杆菌及某些细菌感染,一些抗菌药物的盲目使用,导致耐药菌株越来越多。根据已进行的大量药敏试验结果,大肠杆菌、沙门氏菌对曾经敏感的氨基糖苷类、氟喹诺酮类等,均产生了不同程度的耐药性,经常发现对十几种常用抗菌药都不敏感的菌株。这是一个非常危险的信号。所以在临床疾病防治工作中,要取得较好的治疗效果,应扩大常规抗菌药种类进行药敏试验,根据药敏试验结果,选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药,这样才能收到较好的治疗效果。

三、常用的药敏试验方法
兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种,即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法,通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小,判断细菌对该种药物是否敏感。稀释法包括试管稀释法和微量稀释法,通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况,判断其最低抑菌浓度(MIC)。
由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数实验室和基层单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法,目前牛津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简单介绍纸片法。
1、药敏纸片的制作
纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销售。但也可根据需要自制,具体自制的方法如下:
取质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。

2、药液的制备
自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通常用蒸馏水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度,按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。

3、试验操作方法
在超净工作台中或酒精灯旁,用无菌棉签或经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将菌液均匀涂布到平皿中的固体培养基表面。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴5-6片。记住每种药敏纸片的名称。贴完纸片的平皿15分钟后再置于37℃温箱中培养16-24小时,观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈,根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。
药敏试验结果判定标准
抑菌圈直径(毫米)敏感性
>20极敏感
15-20高敏感
10-14中敏感
<10低敏感
0不敏感
实践证明,利用自制药敏纸片进行药敏试验,可以灵活选药,与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量,既能缩短病程,又能避免盲目用药,减少浪费。
四、根据药敏试验选药原则
完成药敏试验后,应根据结果选择敏感性较高,同时价廉、易得、安全的药物进行治疗,以减少耐药菌株,同时还应注意以下原则:
1、在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触,而在给畜禽用药时,必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效,所以在给畜禽用药时,高敏药物一定要配合适宜的给药方法,并予以足够剂量、足够疗程,才会取得好的治疗效果。
2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响,药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70-80%,所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显着应及时换药。
3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此,定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。
4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素,一种抗生素可达到治疗作用时,不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时,应选择联合应用具有协同作用的药物。
5、避开已经使用过的药物或其同类药物,发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。

四、影响药敏试验结果的因素
在以纸片法进行药敏试验时,以下几方面因素可影响试验的结果:
1、培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌,如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次,倾注平板时,厚度应合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般细菌培养温度和时间为37℃ 12-24小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好药敏纸片的培养基先置4℃冰箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较明显的抑菌圈。

五、药敏试验存在的问题
当前进行药敏试验仍然存在一些问题,主要包括以下几方面:
1、方法学不统一,没有标准化。
2、市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质控,质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。

兽医临床中的药敏试验

兽医临床中的药敏试验
目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失,阻碍了养殖业的快速发展,所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药,细菌的耐药性问题正变得越来越突出,不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重,它不仅使抗菌药的疗效降低,疗程延长,死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失,而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类,对人类健康也造成潜在威胁。因此,临床上应合理应用抗菌药,以避免或减少耐药性的产生,而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药,以充分发挥抗菌药疗效,并尽可能减少其不良影响。
一、什么是药敏试验?
抗菌药物敏感性试验(antimicrobial susceptibility test,AST),简称药敏试验,是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验,测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用,以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁,有助于经验性治疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能,也是使用抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。

二、药敏试验的意义
1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性,指导临床合理用药。因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药敏,不需要生物载体,不需要实验动物,操作相对简单,成本相对降低。是一种既经济又有效的方法。
2、可以对流行病学调查进行监控,控制和预防耐药菌株的流行。因为随着新型致病菌的不断出现,各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同,同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株的耐药性,对流行病学调查建立监控,同时采取相应的措施也就可以控制和预防耐药菌株的流行。
3、为临床用药提供参考依据。因为一个正确的药敏试验结果,可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。长期以来,由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消失。不能很好的掌握药物对细菌的敏感程度,不但造成药物浪费,而且还延误病情,给养殖户造成了很大的经济损失。近十几年,在肉鸡生产中,为了控制大肠杆菌及某些细菌感染,一些抗菌药物的盲目使用,导致耐药菌株越来越多。根据已进行的大量药敏试验结果,大肠杆菌、沙门氏菌对曾经敏感的氨基糖苷类、氟喹诺酮类等,均产生了不同程度的耐药性,经常发现对十几种常用抗菌药都不敏感的菌株。这是一个非常危险的信号。所以在临床疾病防治工作中,要取得较好的治疗效果,应扩大常规抗菌药种类进行药敏试验,根据药敏试验结果,选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药,这样才能收到较好的治疗效果。

三、常用的药敏试验方法
兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种,即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法,通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小,判断细菌对该种药物是否敏感。稀释法包括试管稀释法和微量稀释法,通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况,判断其最低抑菌浓度(MIC)。
由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数实验室和基层单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法,目前牛津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简单介绍纸片法。

1、药敏纸片的制作
纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销售。但也可根据需要自制,具体自制的方法如下:
取质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。

2、药液的制备
自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通常用蒸馏水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度,按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。

3、试验操作方法
在超净工作台中或酒精灯旁,用无菌棉签或经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将菌液均匀涂布到平皿中的固体培养基表面。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴5-6片。记住每种药敏纸片的名称。贴完纸片的平皿15分钟后再置于37℃温箱中培养16-24小时,观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈,根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。
药敏试验结果判定标准
抑菌圈直径(毫米)敏感性
>20极敏感
15-20高敏感
10-14中敏感
<10低敏感
0不敏感
实践证明,利用自制药敏纸片进行药敏试验,可以灵活选药,与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量,既能缩短病程,又能避免盲目用药,减少浪费。

四、根据药敏试验选药原则
完成药敏试验后,应根据结果选择敏感性较高,同时价廉、易得、安全的药物进行治疗,以减少耐药菌株,同时还应注意以下原则:
1、在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触,而在给畜禽用药时,必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效,所以在给畜禽用药时,高敏药物一定要配合适宜的给药方法,并予以足够剂量、足够疗程,才会取得好的治疗效果。
2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响,药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70-80%,所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显着应及时换药。
3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此,定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。
4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素,一种抗生素可达到治疗作用时,不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时,应选择联合应用具有协同作用的药物。
5、避开已经使用过的药物或其同类药物,发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。

四、影响药敏试验结果的因素
在以纸片法进行药敏试验时,以下几方面因素可影响试验的结果:
1、培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌,如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次,倾注平板时,厚度应合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般细菌培养温度和时间为37℃ 12-24小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好药敏纸片的培养基先置4℃冰箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较明显的抑菌圈。

五、药敏试验存在的问题
当前进行药敏试验仍然存在一些问题,主要包括以下几方面:
1、方法学不统一,没有标准化。
2、市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质控,质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。
3、因需要先进行细菌的分离培养,所以药敏试验报告出结果时间长,检验与临床缺乏沟通,对于基层兽医站或养殖场,药敏结果不能满足临床治疗要求,容易延误治疗时机。但根据有关报道,也可进行简易的药敏试验,方法如下:无菌取病死畜禽的部分肝、脾等组织,按1:5加生理盐水研磨制成悬液,静置5分钟,用无菌吸管吸悬液,加两滴于营养琼脂板上,涂布均匀,5分钟后贴上药敏试纸,培养、观察抑菌圈大小。
4、对于部分营养需求较高的细菌或微生物,如链球菌和支原体,临床上较难培养,限制了药敏试验的应用。
5、部分养殖场或基层兽医站缺乏做细菌分离培养和药敏试验的意识。绝大多数养殖者或技术人员是在没有明确微生物学诊断的情况下使用抗菌药物,养殖场规模越小,细菌培养和药敏试验做的越少,有的养殖场轮翻使用多种抗菌药物而不做细菌培养和药敏试验,致使疗效不佳,治疗时机延误和药品的浪费。一些病例用药前不做药敏试验,而是在大量使用多种抗菌药物疗效不明显时才想起做细菌培养和药敏试验,而此时细菌已对多种抗菌药产生耐药性。

I. 如何做药敏试验

用药敏实验进行药物敏感度的测定,以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格,条件比较高,仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作,一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题,农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践,逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前,临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法,稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法),抗生素浓度梯度法(E-test法),和自动化仪器等。
纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上,纸片中的药物在琼脂中扩散,随着扩散距离的增加,抗菌药物的浓度呈对数减少,从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时,纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长,而抑菌范围外的菌株则可以生长,从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈,不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度,并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
稀释法
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时也应该包含质控参考菌株的MIC.

J. 什么叫药敏试验

用药敏实验进行药物敏感度的测定,以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格,条件比较高,仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作,一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题,农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践,逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前,临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法,稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法),抗生素浓度梯度法(E-test法),和自动化仪器等。
抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用,但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药,很多致病性细菌产生了耐药性,使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差,不但造成药物浪费,而且还延误病情,给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现,抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同,同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来,各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效,以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度,所以一个正确的结果,可供临床医师选用抗菌药物的参考,并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法,现简单介绍如下。

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