四川小鼠实验动物模型要多久

A. 小白鼠试验

小白鼠进行游泳训练建立过度训练模型。实验结果：经过不同强度的游泳训练后，过度训练组血浆ET(内皮素)的含量(204.76±26.12pg/ml)显着高于对照组(172.89±40.03pg/ml)；血浆CGRP(降钙素相关肽)含量(84.06±28.69pg/ml)显着低于对照组(142.30±40.40pg/ml)和一般训练组(151.41±81.79pg/ml)；ET/CGRP(2.71±0.96)显着高于对照组(1.65±1.10)和一般训练组(1.76±0.96)。
一般训练组血浆ET、CGRP和ET/CGRP与对照组相比，虽然有所上升，但无显着性差异。结果表明：过度训练可使机体分泌ET增多，而分泌CGRP减少；过度训练导致ET和CGRP的分泌失调,可能是过度训练引起运动性高血压的病理生理机制，动态观察血浆ET和CGRP对过度训练的诊断与预防有一定的指导意义。

一、实验对象

实验用昆明种雄性小白鼠38只，体重为17～20 G，由河北医科大学实验动物室提供，将动物随机分为三组，分别是:维生素E组(n＝12)，中药组(n＝15)和生理盐水对照组(n＝11)， 三组同时灌胃喂服20天，维生素E(上海第九制药厂产品) 日给量100 mg/kg*d，中药为复方刺五加液(河北省人民医院配制)日用量为刺五加300 mg/kg*d以及五味子700 mg/kg*d；每只动物用生理盐水为0.5 ml/d， 实验期间所有运动的喂养如常不变。

二、实验方法

在灌服20天后(小鼠体重增至30～32 g，三组间无差别)，三组动物同池游泳，水温22℃，水深约为小鼠体长2倍，室温18℃，小鼠游泳至力竭取出断头处死，留脑，心、肝、肾和股四头肌组织，放入4 ℃预冷的生理盐水内洗净血液，用滤纸吸干， 分别称重，并用4℃预冷的生理盐水在组织研磨器中分别制成10%脑匀浆，5%心、肝、肾匀浆和20% 肌肉组织匀浆备测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)之用。

小鼠游泳至衰竭的标准规定为:动物不能在水中保持上浮， 开始下沉，取出后尾部受刺激逃避呈踉跄步态，身体不能保持平衡。但呼吸心跳存在。

三、主要试剂与仪器(从略)

四、检测方法

1.脂质过氧化物的测定:以硫代巴比妥酸比色法〔4〕分别测定各样本内MDA的含量。

2.超氧化物歧化酶测定(SOD):采用邻苯三酚自氧化法〔5〕。

五、统计方法

两实验组分别与对照组各指标均数间相互比较，应用t检验。所有数据应用CASIO—3600P计算器程序处理。

结 果

一、实验组与对照组运动耐力比较

见表1。以最大运动时间作为衡量耐力的指标，在相同游泳条件下，二实验组分别与对照组相比较，动物游泳至力竭的平均时间均无显着差别。

表1 实验组与对照组运动耐力比较

组 别
平均最大游泳时间(分*秒)
对 照 组 50.45(50.27)
维生素E组 49.08(49.05)*
中 药 组 48.93(48.55)*

注 与对照组比较 * P＜0.05

B. 建立基因敲入小鼠模型大概需要多长时间

建立基因敲入小鼠模型大概需要多长时间
转基因是过表达原有基因或者新表达原来没有的基因。 knockin是改变原有基因的表达，基本上是做突变，但是不破坏原有基因的完整性， 但是改变该基因的功能。 而knockout是敲除该基因，即是原有基因失活，其中又有保留原基因部分完整性和 不保留两种， 保留完整性通过剔除一部分序列但是保留该基因in frame读码框正确， 这样的情况可能产生domain negative效应；不保留完整性则打乱原基因读码框，使 得细胞产生non sence mediated decay而降解该基因mRNA，进而不产生该基因编码产物。 这几种方法的原理以及操作不太一样，严格来说，目的也不完全一样。

C. 求助：如何建立小鼠免疫抑制模型

• 免疫抑制动物模型的制备（三个制模方法选其一即可，造模后进入第二步实验检测造模是否成功。）
  动物的选取：成年C57BL雄性小鼠，或成年BALB/c雄性小鼠。无论选取哪一类小鼠，都要控制鼠龄、性别和体重，以减少个体差异。
  实验动物的分组：分为实验组、对照组、阳性对照组、阴性对照组、假手术组五组。
  1.由免疫抑制剂诱发的免疫功能低下模型
  造模原理：免疫抑制剂是对机体的免疫反应具有抑制作用的药物，能抑制与免疫反应有关细胞（T细胞和B细胞等巨噬细胞）的增殖和功能，能降低抗体免疫反应。
  操作方法：
  可以选用下列方法之一诱发免疫功能低下模型：
  1.环磷酰胺 80-100mg/kg 体重，皮下注射，5d。
  2.氢化可的松 50-100mg/kg 体重，每天皮下注射，6~8d。
  3.抗淋巴细胞血清 每只鼠腹腔注射抗淋巴细胞血清0.2ml，5~6d
  造模方法评价：以上三种免疫抑制剂方法均可造出相应的模型，但是他们各有利弊，实验时应该根据具体实验情况选择相应的试剂。制备抗淋巴细胞血清法比较复杂，而且抗体成分可能因为分离不彻底而发生交叉反应，但是此法特异性高，不会对动物造成大的损伤，环磷酰胺和氢化可的松会一定程度上造成动物机体的损伤，在研究中，在同等条件下，分别以常规剂量的氢化考的松（HY）和环磷酰胺（CY）复制免疫抑制动物模型，结果发现：HY模型的各项免疫指标均处于高度抑制状态；CY模型在IL-2的产生水平上处于高度抑制状态，在巨噬细胞吞噬率和血清溶菌酶含量方面呈明显抑制作用，但程度上低于HY模型，然而在巨噬细胞吞噬指数和IL-1产生水平上未呈现明显抑制作用；结果提示：用HY可复制出稳定、典型较为理想的免抑制动物模型。
  2.由辐射诱发的免疫功能低下模型
  操作方法：使用X射线6~8Gy1次照射，4d后可检测。
  造模方法评价：此法制备的动物模型见效快，但是动物存活时间短，对长期实验不利，短期实验使用。
  3.由强电刺激引起的免疫功能低下模型
  条件允许的话，此法应用成年雄性的NIH小鼠。NIH小鼠对应激性疾病的抵抗力较强。
  操作方法：将多用电针仪（电压U=0.2V，电流强度I=4~5μA，连续密波）正电极连接小鼠阴茎根部腹部皮肤，负电极连接阴茎背侧部皮肤，每天刺激两次，每次刺激10Min,连续刺激10d。
  造模方法评价：此法原理是造成小鼠进入应激状态，使其糖皮质激素分泌增加，导致胸腺萎缩免疫功能低下，故造模过程中应该注意预防应激性疾病如胃溃疡、应激性心脏病以及应激性高血压等的发生。

D. 基因敲除小鼠扩繁大约多久可以达到纯合子

基因敲除小鼠扩繁达到纯合子的时间是根据基因敲除的要求来确定的。大约要11-15个月。

基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。

需要实验小鼠的可以联系苏州赛业。赛业生物已服务全球数万名科学家，产品和技术已直接应用于包括CNS（Cell，Nature, Science）三大期刊在内的学术论文。除了提供基因敲除、基因敲入、条件性基因敲除模型定制服务外，赛业生物还有专业的手术疾病模型团队，可以提供多种复杂精细的小动物手术疾病模型；药物筛选评价小鼠平台可以提供从欧美行业领袖引进的免疫缺陷鼠、用于心血管及阿尔茨海默症等研究的人源化小鼠；国际标准化无菌鼠技术平台可以提供无菌鼠、无菌动物定制服务、微生物菌群移植服务等基于无菌动物模型的各类产品和服务，结合赛业生物成熟稳定的基因编辑小鼠平台，还可帮助您研究菌群与基因的互作机制。

E. 实验用白鼠哪里能买到

医学生、生化专业的学生或许想不到，有一天他们在实验室解剖的小白鼠，也能成为拟上市公司的主营业务。
科创板官网显示，江苏集萃药康生物科技股份有限公司（以下简称“集萃药康”或“公司”）已于日前过会，而上一个以包括小白鼠在内的实验动物为主营业务的科创板公司南模生物，已于11月初注册生效。
根据Frost & Sullivan统计，2019年中国实验小鼠产品和服务市场规模为28亿元。相比其他动辄百亿起步的赛道，这么小的一个细分市场，竟然能跑出两家拟上市公司？
一只耗子一万块钱？
根据招股书，2018年至2020年，集萃药康分别录得营收5329.06万元、1.93亿元与2.62亿元，同期扣除非经常损益后归属于母公司的净利润分别为1039.67万元、3372.52万元与6646.04万元。而同时期南模生物营收分别为1.21亿元、1.55亿元与1.96亿元，扣非归母净利润分别为329.04万元、1240.46万元与3275.55万元。
从主营业务构成来看，集萃药康专注于实验小鼠模型，而南模生物涉及的实验动物包括小鼠、大鼠、斑马鱼、线虫等，不过其营收贡献比例较高的基因修饰动物模型主要为小鼠模型。集萃药康主营业务中营收占比过半的是“商品化小鼠模型销售”，包括斑点鼠、免疫缺陷小鼠模型、人源化小鼠模型、疾病小鼠模型与基础品系小鼠，最贵的“斑点鼠”2020年销售单价为11723.99元/只，最便宜的基础品系小鼠也要62.91元/只，而南模生物并未披露小鼠模型的销量与单价。
集萃药康主营业务收入构成 图源：招股书
“斑点鼠”是啥？根据集萃药康招股书，“斑点鼠”其实是基因敲除小鼠，公司于2019年起大规模开展“斑点鼠计划”，旨在预先构建小鼠所有（2万余个）蛋白编码基因的小鼠品系库，目前已经实现了基因敲除小鼠的产品化供应，将原来的客户定制交付周期由4~7个月缩短至最少7天。截至2021年6月30日，公司“斑点鼠计划”资源库已拥有约1.9万个品系，涵盖了肿瘤、代谢、免疫、发育、DNA及蛋白修饰等研究方向的基因。
从公司技术实力来看，集萃药康拥有数量更为庞大的小鼠品系资源，而南模生物的人源化小鼠模型具备一定优势。集萃药康拥有约2万个小鼠模型品系，领先于同行业可比公司，包括南模生物的6017个；而南模生物表示，针对CRO公司、医药公司等开展药效研究及评价的人源化小鼠模型方面，南模生物拥有285种人源化基因修饰模型品系，而集萃药康拥有69个。
同行业可比公司小鼠模型品系数量 图源：招股书
超过70%的毛利率？
从毛利率来看，尽管业务模式和主营产品类似，但集萃药康的毛利率远高于南模生物。2018年至2020年，集萃药康主营业务毛利率分别为68.24%、68.95%与76.21%，同期南模生物仅为44.32%、50.55%与60.34%，而集萃药康的“斑点鼠”业务毛利率更是高达95%。
在对监管问询的回复中，集萃药康表示，公司将繁殖鼠与库存鼠分别计入生产性生物资产和消耗性生物资产，将相关支出计入管理费用，并将消耗性生物减值计入资产减值损失，并未归集至营业成本；而南模生物不存在生产性生物资产与消耗性生物资产，小鼠相关的饲养繁育成本均归集至营业成本核算。并且，比起位于上海的南模生物，集萃药康主要经营场所位于南京和常州，区位人力成本相对较低，2020年公司生产人员平均薪酬为9.39万元，而南模生物为15.88万元。
而监管在问询中也提到，集萃药康研发费用中材料支出较大，如何区分研发领料和生产成本？根据招股书，2018年至2020年，集萃药康研发费用中的材料费用分别为83.55万元、976.22万元与1195.23万元，占研发费用比例为7.95%、32.21%与24.79%；而生产成本中“直接材料”一项同时期分别为777.79万元、1668.86万元与1446.92万元。公司回复称，研发部门直接领料按金额计入研发费用，而研发部门委托生产部门完成部分工作时，按照使用情况按月在生产成本与研发费用之间分摊；公司列出的研发费用材料支出明细则显示，占大头的是实验器材，2018年至2020年实验器材费用分别为44.00万元、728.23万元和941.58万元，占材料支出比例分别为52.66%、74.60%与78.78%，包括DNA提取试剂盒、糖化血红蛋白检测试剂盒等。
集萃药康研发费用中材料支出明细 图源：问询函回复
“确实可能会有企业试图把生产成本转移到研发费用上，一个是毛利率会显得高，再一个科创板有研发费用占营收比例的红线，同时研发费用也有加计扣除的政策。”某投行人士对银柿财经记者表示，“但具体案例还需要具体分析，没有底稿和原始凭证也是比较难判断的。”
2018年至2020年，集萃药康剔除股权激励成本后的研发费用率分别为19.73%、15.72%与16.33%，同期南模生物为14.49%、18.53%与17.54%。

F. 小鼠抑郁模型造模多少天

小鼠抑郁模型造模5到6天。

小鼠造模方法。方法三次造模分别采用：免疫介导法：小鼠经6.0Gy60Coγ射线亚致死量全身由尾静脉输入DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液1×106个细胞/0.2ml/只。混合方法：小鼠一次全身3.0Gy60Coγ射线照射后，分照射后，5、6天腹腔注射环磷酰胺50.0mg/kg及氯霉素62.5mg/kg。

中文摘要

随着生活节奏的加快和生存竞争压力的增大，抑郁症患者日益增多。一般认为，抑郁的发病是由于中枢神经系统内5-羟色胺（5-HT）功能下降引起的，选择性5-HT再摄取抑制剂成为目前临床上一线的抗抑郁药物。然而，关于中枢5-HT与抑郁症发病间的关系仍存在很多不明之处，很大原因是已有的动物模型存在一些明显的缺陷。

G. 小鼠模型的分类有哪些

集萃药康科创板上市申请日前获受理。集萃药康是一家专业从事实验动物小鼠模型的研发、生产、销售及相关技术服务的高新技术企业，系亚洲小鼠突变和资源联盟企业成员以及科技部认定的国家遗传工程小鼠资源库共建单位。公司品系资源数量稳居行业前列，累计形成超过16000种具有自主知识产权的商品化小鼠模型。
股东阵容豪华
招股说明书显示，公司控股股东为南京老岩。截至本招股说明书签署日，南京老岩持有公司56.06%股份，高翔为公司实际控制人。公司股东阵容豪华，包括生物医药谷、江苏省产研院、江北新区国资和产业基金。
鼎晖资本、红杉资本、高瓴资本等知名投资机构也在公司股东名单中。其中，杭州鼎晖和红杉安辰分别持有公司6.27%和1.28%股份，珠海荀恒持有公司3.49%股份，深圳高瓴天成三期投资有限公司是珠海荀恒的普通合伙人兼执行事务合伙人。
集萃药康秉承“创新模型，无限可能”理念，基于实验动物创制策略与基因工程遗传修饰技术，为客户提供具有自主知识产权的商品化小鼠模型，同时开展模型定制、定制繁育、功能药效分析等一站式服务，满足客户在基因功能认知、疾病机理解析、药物靶点发现、药效筛选验证等基础研究和新药开发领域的实验动物小鼠模型相关需求。
实验动物是现代生命科学研究发展的基石。小鼠是继人类之后第二种完成全基因组测序的哺乳动物，其基因组与人类高度同源，生理生化及生长发育的调控机理和人类基本一致，同时具有繁殖能力强、世代周期短、饲养成本低等特点，系目前应用最为广泛的实验动物。
公司使用和建立了符合国际AAALAC标准的SPF级动物设施和标准化实验动物质量管控体系，掌握了小鼠模型相关领域基因编辑、辅助生殖操作、表型验证、免疫系统人源化、靶点人源化及药效筛选、动物生产控制及无菌净化等关键技术，建立了基因工程小鼠模型构建平台、创新药物筛选与表型分析平台、小鼠繁育与种质保存平台、无菌小鼠与菌群定植平台。
截至2020年末，公司累计形成超过16000种具有自主知识产权的商品化小鼠模型，品系资源数量稳居行业前列，具有核心技术与资源禀赋双重壁垒。公司开展“斑点鼠计划”，旨在预先构建小鼠所有蛋白编码基因的敲除品系库，涵盖肿瘤、代谢、免疫、发育、DNA及蛋白修饰等研究方向的基因，前瞻性地为生命科学研究提供全新工具选择与可能路径。
公司总部位于南京，在江苏常州、四川成都、广东佛山以及北京大兴建有子公司或分支机构，辐射国内主要市场，快速响应区域客户需求，同时设有美国子公司及欧洲办事处，积极布局海外市场。公司小鼠模型年销售数量约60万只，主要涉及可用于肿瘤药效研究的免疫缺陷小鼠、人源化小鼠以及糖尿病、动脉粥样硬化、老年痴呆等小鼠疾病模型。公司目前服务客户超过1000家，涵盖清华大学、北京大学、四川大学华西医院、中国医学科学院北京协和医院等科研院校和三甲医院，以及恒瑞医药等知名创新药企和CRO研发企业。
拟投资两大项目
公司此次拟募资8.2亿元，用于模式动物小鼠研发繁育一体化基地建设项目和真实世界动物模型研发及转化平台建设项目。募投项目围绕公司现有主营业务和核心技术展开，结合公司未来发展目标和行业发展趋势，针对公司现有业务特点和技术进行深层次分析，可提升公司的行业地位和市场竞争力。
其中，实施模式动物小鼠研发繁育一体化基地建设项目，旨在扩充公司生产能力和服务能力，增强公司创新能力，提升研发、生产、服务一体化水平，增强公司的核心竞争力。真实世界动物模型研发及转化平台建设项目是对现有实验动物模型产业的创新，旨在建立更加贴近现实的小鼠模型，进一步丰富公司小鼠模型资源库，为客户提供高层次、多元化的小鼠模型产品和服务。
公司称，未来将抢抓创新驱动机遇，把握政策红利，继续加大研发投入，提升核心技术能力，推进国际化战略，为生命科学研究与新药开发赋能。
行业发展前景广阔
2018年至2020年（报告期），公司营业收入分别为5329.06万元、19272.06万元和26191.71万元，年均复合增长率达121.70%，呈快速增长趋势。公司主营业务收入占营业收入的比例均超99%，主营业务突出；其他业务收入主要系物业费，金额和占比均较小。
从业务类型看，商品化小鼠模型销售收入分别为3292.62万元、9526.84万元和15259.63万元，年均复合增长率为115.28%，占主营业务收入比例分别为61.79%、49.88%和58.59%，系公司业务收入主要来源。
报告期内，公司研发费用分别为1051.59万元、3030.50万元及4821.64万元，占营业收入比例分别为19.73%、15.72%及18.41%，最近三年累计研发支出占同期营业收入比例为17.53%。
公司核心技术团队稳定，是国内较早开展小鼠模型研究及产业化应用的团队之一，制作了国内首个基于胚胎干细胞重组技术的条件性基因敲除小鼠，并在国内率先将CRISPR/Cas9基因编辑技术用于小鼠模型制作，在实验动物小鼠模型研究开发领域积累了丰富经验。截至报告期末，公司拥有核心技术人员6名；研发人员128名，占员工总数的16.64%。
公司所属行业发展迅速，且前景广阔。国内实验动物市场相对处于发展早期，受益于政策支持、健康产业发展迅速、临床试验风险前置、基因编辑技术迭代等驱动因素，行业处于高速增长阶段。根据Frost&Sullivan测算，中国啮齿类实验动物产品和服务市场规模从2015年的10亿元增至2019年的33亿元，年均复合增长率为34.7%。预计到2024年中国啮齿类实验动物产品和服务市场规模将增至98亿元，年均复合增长率约为24.2%。随着市场规模的继续扩大，发行人面临良好的发展机遇，有望持续获得稳定的盈利来源。
公司表示，未来将推动国际化战略。公司已在美国建立子公司，并设有欧洲办事处，作为撬动国际市场的支点。

H. 怎样构建小鼠模型

6月10日，在钟南山院士指导下，广州医科大学附属第一医院/呼吸疾病国家重点实验室赵金存教授团队与另外四家中美科研团队合作，在国际顶级学术期刊《细胞》杂志在线发表了题为“可广泛应用于新冠肺炎发病机制研究、疫苗研发和治疗方法评价的动物模型建立”的研究成果，应用表达新冠病毒受体人ACE2的腺病毒转导小鼠，快速建立首个新冠肺炎非转基因小鼠模型，该项目负责人赵金存教授在接受总台央广记者独家采访时表示，此动物模型可应用于新冠治疗药物效果评价、疫苗效果测试及新冠致病机制等多方面研究。
赵金存教授在实验室
参与该项研究的另外四家中美科研机构为：广州海关技术中心国家生物安全检测重点实验室(P3实验室)、美国爱荷华大学、广州再生医学与健康广东省实验室、中国科学院广州生物医药与健康研究院。
据了解，新型冠状病毒SARS-CoV-2入侵受体为 human angiotensin-converting enzyme 2(hACE2)，而小鼠同源受体mouse ACE2由于氨基酸关键位点差异，不能介导病毒入侵。疫情早期，虽然我国毒株已分离，但由于国际和国内hACE2转基因小鼠保有量有限，繁育耗时长，临床症状不典型，造成我国COVID-19肺炎诊疗方案、药物、疫苗和致病机制体内验证严重滞后。
在这项研究中，研究团队利用腺病毒载体，在小鼠肺脏转导表达hACE2，成功解决上述科学难题，建立国际首个非转基因新冠肺炎小鼠动物模型。小鼠在SARS-CoV-2感染后，肺脏中可检测到高滴度新冠病毒，每克组织中病毒滴度可达10^7 PFU，并出现体重下降和类似新冠肺炎病人的临床病理表现。
动物模型模式图
随后，通过对比野生型小鼠与I型干扰素受体缺陷小鼠和干扰素通路关键基因STAT1敲除小鼠在新型冠状病毒感染后的差异，发现I型干扰素在新冠病毒感染中起到保护作用。此外，在此模型中，新冠病毒感染可诱导机体产生强烈的病毒特异性T细胞应答及体液免疫应答。更为重要的是该研究团队利用此小鼠模型评价了新冠感染康复者血浆和瑞德西韦对新冠病毒感染的治疗作用。结果显示，给予血浆治疗和药物组的小鼠肺脏病毒滴度均明显降低，且病理损伤减轻。
过继转移新冠康复者血浆和瑞德西韦治疗组，小鼠肺脏病毒滴度下降、肺脏病理损伤减轻。
本模型相比传统受体转基因小鼠模型，构建周期短(2-3周)，不需要特殊繁育，可用于多种基因修饰小鼠动物模型构建;且技术方法简单，易于重复，适宜大规模推广，有利于我国抗病毒药物、抗体、疫苗的应急验证及致病机制研究，并已给我国多家单位广泛共享，有效缓解了我国COVID-19肺炎动物模型缺乏的难题。
值得一提的是，来自华盛顿大学医学院等单位的研究人员同样在Cell杂志背靠背发表了类似的研究成果。
（据央广网）

I. 我想问一下，用昆明小鼠你是怎么造好动物模型的呢我皮下种植肿瘤细胞并没有长出结节。

KM鼠只能接种一些普通的鼠源性瘤株，鼠源瘤株一般用C57接种，人源瘤株用裸鼠

J. 小鼠模型如何构建

小鼠模型可通过TALEN、ZFN、ES同源重组、CRISPR/Cas9等基因编辑技术构建。集萃药康基因编辑平台熟练掌握各类基因编辑手段，可定制不同策略的小鼠模型，大大满足用户实验需求。