腺病毒动物实验维持多久

A. 腺病毒可以直接注射动物吗，如何操作

腺病毒对啮齿类动物有致癌能力,或能转化体外培养的...也可用病人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。...在作眼的检查时应严格无菌操作,对所用设备充分灭菌...
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B. 腺病毒的分类

分类及自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血清型，其中人腺病毒有49种，分为A、B、C、D、E和F六个亚群（subgroup）。基因治疗常用的人的2型及5型腺病毒在血清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu (plaque forming unit)/ml，其在单个细胞中的基因组拷贝数可达104（约占细胞总DNA的10%）。病毒颗粒比较稳定，通过CsCl梯度离心可以达到1010~1011pfu/ml，满足动物实验的要求。

C. 腺相关病毒质粒在体内多久开始表达

腺相关病毒（Adeno-associated Virus，AAV）属于细小病毒科（parvoviridae），单链DNA病毒，经过改造的rAAV病毒工具已被广泛的应用在动物水平的基因表达、基因操作和基因治疗。AAV是迄今发现的一类结构最简单的天然的复制缺陷型病毒，不能独立复制，只有在辅助病毒如单纯疱疹病毒存在时才能完成复制，生成子代AAV。

AAV病毒载体的优势

1.表达时间长： 绝大多数重组rAAV 不会整合到基因组上，而是在宿主细胞中串联形成附加体（episome）存在于细胞核中 ，细胞在细胞复制和分裂后会丢失附加体，并因此失去基因表达能力，rAAV在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达6个月以上;
2. 扩散性强： rAAV 的体积小，滴度高，因此具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性，可以穿透血脑屏障，是理想的神经元和胶质细胞感染工具;
3. 特异性强： rAAV 有数十种常用的血清型，不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力，是动物实验首选;
4. 安全性高： 目前还没有发现AAV 对人体致病，是美国FDA 批准的可以直接用于人体基因治疗的最安全的病毒载体;
5. 免疫原性低： 当AAV 用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时，不易造成免疫反应;
6. 高稳定性： rAAV 病毒在4℃可以保存1 周，并且对氯仿等试剂具有抗性。

应用

1.介导目的基因 /RNAi 基因表达；
2.基因治疗载体； 
3.神经环路研究中使用最广泛的表达工具。

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D. 腺病毒有哪些

自上个世纪50年代发现并成功分离腺病毒以来，已陆续发现了100余个血清型，其中人腺病毒有49种，分为A、B、C、D、E和F六个亚群（subgroup）。基因治疗常用的人的2型及5型腺病毒在血清学分类上均属C亚群，在DNA序列上有95%的同源性。二者的增殖能力非常强，滴度通常可以达到109pfu (plaque forming unit)/ml，其在单个细胞中的基因组拷贝数可达104（约占细胞总DNA的10%）。病毒颗粒比较稳定，通过CsCl梯度离心可以达到1010~1011pfu/ml，满足动物实验的要求。

E. rescue 基因转染多长时间

2016-07-2920:57 来源：生物学霸 点击次数：143在基础医学与生物学研究领域中，基因干预越来越重要，方法也越来越多。如何实现细胞和动物水平上的基因高表达或抑制，我们需要精准、高效的基因转染方法。 目前动物体内基因转染方式，广义上来说有两种： 1、基因工程小鼠 基因工程小鼠，是经典的动物体内基因干预模型，包括转基因小鼠（TGmouse，transgeneticmouse），敲除小鼠（KOmouse，Konckoutmouse），敲入小鼠（KImouse,Knockinmouse）。 基因工程小鼠对生物医药研究发挥了巨大的作用，但也存在不少的限制因素： （1）从受精卵开始的基因干预，经过长时间发育的复杂代偿，所表现出来的功能表型和实际的基因功能表型可能存在巨大的偏差。2015年8月份，nature杂志发表了DidierStainier研究小组发现受精卵敲除egfl7基因和成年后用RNA干扰阻断egfl7的表达，模式生物所得到的表型完全不一样。 （2）基因工程小鼠周期长，成本高。君忆否，动物房里伺候老鼠，一把屎一把尿拉扯它，给它找对象，还得帮它养孩子。（哭死） 2、病毒载体介导的动物体内基因转染 目前最主流的病毒载体工具有三种：腺病毒（adenovirus），慢病毒（lentivirus），腺相关病毒（AAV，adenovirusassociatedvirus）。 相比较基因工程小鼠的局限性，病毒载体优势明显： ●避免了发育代偿的问题。 ●周期和维持成本要小得多。 ●病毒载体介导的基因干预可以在动物造模后进行，作为一个基因治疗干预手段，与临床更加接近，而不仅仅是完成基因功能研究。 图：AAVinvivo实例——在体感染小鼠海马组织对比 （1）慢病毒 慢病毒由于其本身的基因组整合特性，长时间表达，因而在细胞基因转染中被广泛用于建立基因稳转细胞系。但在动物活体（invivo）水平，慢病毒相比腺病毒和腺相关病毒，劣势明显。 a.慢病毒滴度的限制：动物体内基因转染对注射的活性病毒载体总量及注射体积都有极高要求，而注射体积往往是容易被忽略但实际上限制最大的因素，如小鼠脑室注射，注射的体积不能超过2μL。同样的病毒注射总量，病毒滴度越高则注射的体积数越小，而比慢病毒由于滴度限制(108～109TU/mL）,单位体积所含的病毒活性病毒颗粒数相比腺病毒和AAV少得多，因此在动物体内（invivo）基因转染的应用上，慢病毒的转染效果不理想。 b.潜在致瘤性：慢病毒整合到宿主细胞的基因组中，形成稳定的持续表达。虽然普遍认为慢病毒是相对安全的，但这种随机插入仍会有致瘤的潜在危险性。 （2）腺病毒 腺病毒载体在动物基因转染实验中，特点突出且鲜明： a.腺病毒能够在注射干预的72小时即开始强烈表达，因而对于一些干预窗口特别短的急性体内基因转染，腺病毒有着显着的优势。 b.腺病毒载体在体内的表达时程为2～4周，四周后表达基因表达衰减明显；如需要延长表达时间，可在第一次注射两周后进行第二次注射。 图：不同剂量的腺病毒载体体内基因转染的起效时间曲线J.KOLLSetc.Proc.Natl.Acad.Sci.USAVol.91,pp.215-219,January1994/ c.腺病毒有较高的免疫原性，通过系统性给药比较容易激活免疫系统产生相应的抗体，影响体内基因转染效果，因此腺病毒载体的是目的脏器的局部注射（肝脏例外）。最常见的腺病毒载体给药方式为原位多点注射，比如骨骼肌，心肌，肿瘤组织等，一般选取3～5个注射点，每个点10µL左右的注射量。 （3）腺相关病毒（AAV）：动物体内基因转染神器 腺相关病毒，即AAV，是最优秀最安全的动物体内基因转染工具，相比较慢病毒等其他病毒载体，AAV有滴度高，免疫原性极低，表达时间长，无任何致病性及病理毒理作用，病毒颗粒小，扩散范围广，多血清型且有相对组织亲和性等优点。 AAV有多种血清型，每种血清型的靶器官亲和力各不相同，这一点决定了AAV与其他病毒载体相比，更具有选择性。汉恒生物在原有的AAV血清型基础上，开发出器官亲和型。

F. 国自然标书中实验用到腺病毒需要弄生物安全承诺书材料吗

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从事病原微生物检测工作，对所从事检

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遵守《实验室生物安全通用准则》

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《传染病防治法》

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章、制度、技术标准的规定，严防责任事故的发生。

 

2

、认真学习中心体系文件的相关规定，遵守微生物实验室

各项规章制度，严格检验检测程序。

 

3

、积极参加生

G. 给大鼠注射腺病毒和慢病毒的区别

腺病毒优点：感染效率高，很多细胞都能达到近 99%；纯化后的腺病毒可以直接进行动物活体注射

H. 腺病毒存在哪些动物的体内

腺病毒伴随病毒属（AAV）存在于哺乳动物和鸟类。AAV为缺损病毒,它需在宿主同时感染腺病毒并以其作为辅助病毒时才能复制。人的AAV有4型,人血清中普遍存在抗体,但与疾病的关系未定。此外，尚有禽、牛和狗的AAV。

I. 只需打1针的新冠疫苗，保护效果可以维持多久

只需打1针的新冠疫苗，保护效果可以维持至少六个月，所以现在还没有接种新冠疫苗的人们，可以前往社区接种点，去进行新冠疫苗的接种工作了，毕竟如果要形成群体免疫，需要百分之七十以上的人有免疫力，才能达到一定的效果。接种的流程也非常的简单，带上身份证，直接去社区排队接种就可以了。

但和两针剂的疫苗接种人群一样，有部分人最好是不要接种的，比如自身免疫疾病患者，慢性病的发病期间，还有一些凝血功能障碍患者，最好都不要接种新冠疫苗。此外，接种过一剂的人群，建议继续接种灭活疫苗，不建议接种腺病毒疫苗加强，所以之前接种过一针的患者，就不要去接种了。

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