Ⅰ 求助动物组织的DNA提取试剂盒
动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒
操作步骤:
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机
在室温下离心。
样品的处理:
a、细胞:取 1×10
6-1×10
7个悬浮培养细胞,12000rpm 离心 1min 收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处
理,再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,
振荡至彻底混匀。
b、组织:组织量不宜过大,一般不要超过 25mg,可以使用匀浆器匀浆,最好用液氮研磨成粉末状,再用
预冷的 PBS 或无菌水充分悬浮,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,振荡至
彻底混匀。
向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),55℃放置 15min。
加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,55℃水浴消化,细胞消化时间较短,组织消化时间较长,
一般需要 1-3 个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)。消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。
消化完全的指标是:液体清亮及粘稠。
加入 200ul 体积溶液 B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可放置于 75℃ 15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致堵塞
吸附柱。
加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都
加入吸附柱中。
12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸
附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,
否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置
5min,12000rpm 离心 2min。
可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。
注意事项:
试剂盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要
用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
Ⅱ DNA会在高温下被分解吗……
会。
一般到了90度以上,dna双螺旋结构就会解开,所以在体外人工合成dna的过程(pcr技术)中,人们将温度升到95度使dna解旋。
不过,当dna分子解旋后,如果温度缓缓下降,解开的双螺旋结构还可以恢复成原先的双螺旋结构。
Ⅲ 生物之间会相互捕食,那么问题来了,他们的DNA都哪去了是被消化了还是排出去了,如果DNA不被分解
脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。
你剖开生物学观念,用化学观点看看,DNA也是一种有机物。化学角度在消化过程中DNA和其他有机物区别不大。
Ⅳ 物品放置多久后DNA会消失
DNA是稳定性较好的遗传物质,一般遗留在衣物或者卫生纸上,几年内都是可以采集进行DNA提取的。提取出来的DNA是完整可用的,即便有所降解,也是部分的,继而可以进行下一部的个体识别或亲子鉴定。
历史
DNA最初是由瑞士生物化学家弗里德里希·米歇尔(Friedrich Miescher)1869年从手术绷带的脓液中分离出来的,由于这种微观物质位于细胞核中,当时被称为核蛋白(nuclein)。
1919年,Phoebus Levene确定了DNA由含氮碱基,糖和磷酸盐组成的核苷酸结成。Levene提出DNA由一条通过磷酸盐结合在一起的核苷酸组成。
Ⅳ DNA分子什么时候会被水解掉 为什么要水解掉
理论上说,只要你还活着,DNA都每时每刻在水解...
生物学上解释的话,DNA在被消化阶段就会完全水解,动物体内有些器官是有能分泌DNA水解酶的,这些酶是可以将食物中的脱氧核糖核酸(DNA)完全水解的.
至于,为什么要水解的话,比如你吃掉食物,然后小肠中的DNA水解酶会把食物中的DNA水解成小分子物质易于消化吸收.
Ⅵ 动物的尸体会腐烂掉是因为微生物的分解通常一具被完全分解掉的动物尸体(包括骨架)需要多长时间里面
是因为分解者的分解,分解者包括微生物,但不止微生物,比如老鹰也可以帮助分解动物尸体。分解时间不等,一个星期到一个月,甚至两个月以上都有可能。里面的有机物会被全部分解,包括DNA。