A. VP实验中,为何枯草芽孢杆菌会变红色
伏-普试验，目的是检查细菌是否能分解葡萄糖，产生乙酰甲基甲醇。
阳性对照菌是产气肠杆菌，分解葡萄糖（被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，36℃18~24h）产生丙酮酸，再将丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇，在碱性条件下（乙液-40%KOH溶液），被氧化为二乙酰，与培养基蛋白做郑胨中精氨酸等所含的胍基（甲液-6%α-萘酚酒精溶液？）结合，通常在10min内形成红色化合物。
若不显色，放置于50℃水浴2h，或放置于37℃培养箱中4h，充分摇动，庆胡肆观察培养液反应结果，不誉轿显红色为阴性，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。
枯草芽孢杆菌可以分解葡萄糖
B. 自来水中有什么菌
你照片中的应该是革兰氏阳性菌祥桐，属于杆菌类谨兄坦型。
我们熟悉的大肠杆菌是革兰氏阴性菌。
对于大肠杆菌，如果是处理合格的自来水，应该是每100ml水中不得检出，以控制病原菌及病原微生物的数量。
其它菌群是每毫升水中允许尘返有100个菌落数。
C. 无菌检查时,阳性对照菌包括哪六种
根据2015版中国药典1101：金黄色葡萄球菌毁铅芦、大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽激罩孢杆菌、白色念珠菌、纤带黑曲霉
D. 生活饮用水检测大肠埃希氏菌、肠球菌的意义.为什么选择五种指示菌呢
生活饮用水一般不检测大肠埃希氏菌、肠球菌的,也并没有选择五种指示菌（根本没这说法）,基本上都是以一类菌作为一个项目.
其实生活饮用水的检测项历唤目有很多,但是如果没有特殊要求,一般只做三项：细菌菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌群,这些项目综合体现了生活饮用水的水质和污染情况.
如果你一定要问那两个项目的意义,其实大肠埃希氏菌、肠球菌和耐热大肠菌群的意义是稿烂者基本一致的,都是体现水质受粪便污染的情况.其实耐热大肠菌群就是因为适合我国国情、检测成本低廉、方便直观,这样才以这个项目来代替大肠埃键薯希氏菌的.
E. 生活饮用水中大肠埃希氏菌检验探讨
水样中的细菌包括很多“属”和很多“种", 我国《生活饮用水卫生标准》2006版[ 1] 的卫生学评价标准是以菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌4项作为微生物指标。
总大肠菌群可来自人类和温血动物的肠道及自然环境, 包含有埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属等一大群在37℃经24小时培养能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。他们在伊红美蓝平板生长特征是：（1）深紫黑色、具有金属光泽；（2）紫黑色、不带或略带金属光慎瞎败泽；（3）淡紫红色菌落。
耐热大肠菌群，又称粪大肠菌群，主要包括埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属[6],是利用提高温度的方法将大自然的大肠菌群和粪便中的大肠菌群区分开的，它是一群能在44.5 ℃下生长的大肠菌群，只有来源于动物和人类粪便的大肠菌群能生长，而来自大自然的大肠菌群不能耐热生长[8-9]。
大肠埃希氏菌(Escherichiacoli),以前常称大肠杆菌, 广泛存在于人类和温血动物的肠道中, 是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群, 维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌.虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌, 但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时, 可引起肠外感染。某些血宽颤清型可产生毒素, 为致病性大肠埃希氏菌, 可引起人类腹泻。所以生活饮用水中大肠埃希氏菌成为肠道疾病的重要致病菌之一。[2]
他们从属范围逻辑关系如下
《生活饮用水卫生标准》2006版标准, 增加了生活饮用水中大肠埃希氏菌的检验。
为了提高实验室检测能力，近日，本实验室开展了生活饮用水中大肠埃希氏菌检测的质控活动，质控活动达到如下目标：
一、使用工作中分离的耐热大肠菌群、标准菌神雹株产气肠杆菌、标准菌株大肠埃希氏菌三种菌进行试验，观察不同大肠菌群在EC-MUG培养基荧光实况，取得阳性标本荧光视觉效果。
二、使用的试管进行酸浸泡、蒸馏水处理和水龙水直接清洗处理，寻找大肠埃希菌荧光效果影响因素。
三、使用北京陆桥EC-MUG培养基试剂及青岛海博EC-MUG培养基试剂进行比较试验，评价实验室常规使用的试剂是否优良。
1材料与仪器
1.1 EC-MUG培养基, 购自北京陆桥有限责任公司、青岛海博
1.2伊红美兰培养基, 购自北京陆桥有限责任公司。
1.3营养肉汤，购自北京陆桥有限责任公司。
1.4培养箱, 36℃ ±1℃;44.5±0.5℃;波长366nm紫外灯
2方法与结果
2.1方法原理
大肠埃希氏菌能特异性产生产生β -葡萄糖醛酸酶(β -glucuronidase), 此酶能分解培养基上的EC-MUG荧光底物释放出荧光产物, 使培养基在366 nm紫外光下产生特征性荧光, 以此技术来检测大肠埃希氏菌。
2.2操作步骤与结果
上图是产气肠杆菌与大肠埃希氏菌在EC-MUG培养基经44.5℃培养后，在日光灯背景下，产气肠杆菌液体清亮，说明产气肠杆菌在44.5℃中不能生长繁殖；大肠埃希氏菌液体混浊，说明大肠埃希氏菌在44.5℃中能生长繁殖。
对上述经培养过的EC-MUG培养基，在日光灯观察背景下，使用366nm紫外线灯进行观察。产气肠杆菌依然清亮，无蓝光；不同稀释度的大肠埃希氏菌菌液有明显的蓝光，蓝光间无明显差别。因此，在观察大肠埃希氏菌发酵效果时，可以在普通光线下，使用366nm紫外线灯进行观察，结果显着。
上图为在暗室下对前述经培养过的EC-MUG培养基观察实验效果。大肠埃希氏菌发酵后产生荧光，并且不同稀释度的菌液，目视无显着差别；与产气肠杆菌效果阴性效果有非常明显的差别。产气肠杆菌培养管有微弱荧光，可能存在EC-MUG培养基自身有荧光事实！
该图是灭菌蒸馏水与EC-MUG培养基效果比对。1、2试管是泡酸清洗的试管，5、6为未泡酸清洗的试管。
在暗室下观察，产气肠杆菌在EC-MUG培养管相对于蒸馏水，用手机拍照有明显荧光，实际观察中，这种荧光相对弱些，但依然是有荧光产生。所以，普通试管及蒸馏水可能产生的荧光可以忽略不计，但试剂本身产生有一定量的荧光是实验事实。
因此，为了减少个人观察经验不足，建议，在实验过程中，应该带标进行比对观察，这样头脑中才有荧光阴阳直观效果。
上图中的耐热大肠菌群，是日常工作中检出的工作株，实验室证实他们在伊红美兰平板上能产生铁锈色样金属光泽的大肠菌群，属于耐热大肠菌群。目前该菌在EC-MUG培养基经44.5℃培养后中也能混浊生长。
在日光灯背景下用三用紫外灯366nm紫外线波观察，各个试管有微许蓝光，实际目视观察没有很强。手机拍照显示都有微量荧光效果，产气肠杆菌颜色似乎还更深点。可以判断全部10管试验管均为大肠埃希氏菌阴性。
上图为暗室下对产气肠杆菌和工作株的耐热大肠菌群在EC-MUG荧光效果图。手机拍照显示有较强荧光，实际目视效果较弱，如没有阳性对照比较，易误以为大肠埃希氏菌阳性结果。但在暗室下观察，该耐热大肠菌群、产气肠杆菌没有差别，也可以判断为结果阴性。
通过产气肠杆菌与实验室耐热大肠菌群在EC-MUG高温培养后的荧光效果比较。产气肠杆菌在高温中不能生长，液体清亮，也不能分解荧光底物。本实验室工作株耐热大肠菌群能在高温中生长，所以液体混浊，但本次工作菌株不分解分解培养基上的MUG荧光底物释放出荧光产物，通过与产气肠杆菌（商品标准菌株）比较，判定为荧光阴性，因此可能本实验室该耐热大肠菌群工作株是耐热克雷伯菌属。（耐热大肠菌群，又称粪大肠菌群，它由埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属组成。非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语。）
以下图片为两种不同试剂用相同处理的试管进行EC-MUG培养观察效果：
暗室下观察荧光效果图，北京陆桥产品阴阳对照明显。
日光灯下，用紫外线灯观察荧光效果图，北京陆桥产品阴阳对照明显。
暗室下观察荧光效果图，青岛海博产品阴阳对照明显。
日光灯下，用紫外线灯观察荧光效果图，青岛海博产品阴阳对照明显。
上图为正常光线下的实验培养结果照片。
通过北京陆桥、青岛海博两种试剂的比较，两种试剂在不同方式处置的试管内培养大肠埃希氏菌，稀释倍数不同，产生的荧光效果是一样的。
3.讨论
3.1、有关文献及实验结果中，试管本身会产生微量荧光[3]。本次实验使用的试管分两部分，一部分是用酸浸泡试管七天以上，然后进行蒸馏水清洗；另一部分是直接用水龙头水直接清洗，两类试管均165℃2小时以上高温灭菌。两类试管分别均分装有蒸馏水对照、产气肠杆菌（标准菌株）、耐热大肠菌群（工作菌株）、大肠埃希氏菌株（标准菌株）。同一菌株在不同方法处置的试管，实验效果无差别，说明一般试管可能产生的荧光对实验没有影响。
3.2、EC-MUG培养基试剂本身经培养后会溢出一定的荧光物质，如果没有阳性对照作比较，可能会误以为是真阳性，造成假阳性结果。因此，初级实验者或日常工作中，应带标准菌株同步实验并观察实验结果。
3.3、两家试剂厂家生产的EC-MUG培养基，阳性结果产生荧光效果均显着，实际操作中，日常生活饮用水中的大肠埃希氏菌试验结果与阴性对照相差无异时，可以按未检出大肠埃希氏菌结果进行报告。
3.4、GB/T5750.12－2006检测大肠埃希氏菌有多管发酵法、滤膜法，大肠埃希氏菌酶底法。推荐的第一法为多管发酵法，是在检测总大肠菌发酵乳糖蛋白胨基础上，有选择地进行EC-MUG培养，从批量工作中，减少了工作量及工作经费。在日常生活饮用水监测中，第一法相对第二法过滤法更简便易行；相对第三法酶底法来讲，更经济实惠。因此，第一法多管发酵法，在常规检测工作中仍是值得推广的方法。
3.5、不同稀释度的大肠埃希氏菌液在EC-MUG培养液中，产生荧光效果无显着区别。因此，总大肠菌发酵后，在下步实验操作中，移液管要一管一用，不同发酵管不能出现交叉污染，防止阳性值偏高。
参考文献
[ 1] GB5749-2006，生活饮用水标卫生标准 [S]。北京：中国标准出版社，2007
[2] , zzzzzz。水中,mmm mmm mmmJ]. 河南预防医学杂志2009年20(3):185-216.
[8] GGkkk.生活饮[J].预防医学论坛, 2008，14(12)：1163-1164.
[9]hhhhhhhhh等.南方地区农查[J]. 公共卫生与预防医学,2014，25(4):11-13.
[gggg[J]。环境科技，2010，23（1）：67－70
[3]
F. 饮用水的微生物污染可以用什么为指示菌
（1）大肠杆菌培养过程要考虑：营养条件、温度、酸碱度等条件．大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、繁殖快等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料．
（2）微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌．紫外线能使乱弊蛋白质变性，还能损伤DNA结构，故用来消灭空气中细菌．
（3）稀释涂布平板法计数活菌的个数，要对待测样品中陪腔适度稀释，避免菌体重叠，影响计数．
（4）可以根据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定或分类．
（5）使用过的培养基及其培养物必卖衫须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散，造成细菌污染．
故答案为：
（1）温度 酸碱度 生活周期短
（2）灭菌 损伤DNA结构
（3）适度
（4）鉴定（分类）
（5）灭菌